细菌的革.docVIP

幻灯片1 细菌的革兰氏染色 幻灯片2 一、实验目的 1. 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 2. 学习并掌握革兰氏染色技术，进一步熟练光学显微镜油镜的使用技术。 幻灯片3 二、基本原理 由于两类细菌细胞的成分和结构不同，导致染色结果不同。 G+细菌呈紫色, G-细菌呈红色。 当细菌用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成初染剂的蓝紫色。 碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫—碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。 幻灯片4 二、基本原理 染色关键在于脱色剂的脱色作用。当用乙醇（或丙酮）处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。 G+细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量较低，用乙醇（或丙酮）脱色时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫—碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。 G-细菌则不同，由于其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量较高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇（或丙酮）溶解，细胞壁通透性增大，使结晶紫—碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。 幻灯片5 三、实验材料 1 菌种：大肠杆菌，枯草芽孢杆菌 2 革兰氏染液 3 其他物品 显微镜，载玻片，盖玻片，擦镜纸，接种针，滤纸、擦镜纸 幻灯片6 四、实验流程 涂片→干燥→固定→草酸铵结晶紫初染（1min）→水洗→碘液媒染（1min）→水洗→95%乙醇脱色（30s）→立即水洗→沙黄复染（1min）→水洗→滤纸吸干→镜检 幻灯片7 涂片固定 单染:结晶紫染液第一次染色1~2min 幻灯片8 脱色:95%乙醇溶液进行脱色洗脱 复染:红色的藩红染液第二次染色 幻灯片9 革兰氏染色镜检结果 幻灯片10 六、实验报告 1、 要求绘制菌体形态图，并标识其菌名和放大倍数。 2、要保证革兰氏染色结果准确可信，应该注意那些方面的问题？ 3、不经过复染这一步，是否可以区分G+和G-? 幻灯片11 幻灯片12 幻灯片13 五、实验方法与步骤 媒染:碘-碘化钾溶液染色30S-1min 炭疽芽胞杆菌 白喉棒状杆菌