温朋飞毕业论文答辩6月14日.pptVIP

猪传染性胃肠炎病毒S基因的扩增及序列测定 主要内容 1.研究背景 2.材料和方法 3.结果 4.结论 5.致谢 1.研究背景 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是猪的一种重要的传染病病毒，给养猪业造成巨大经济损失。近几年来，随着分子生物学技术的广泛应用．在TGEV的各个方面的研究都取得了长足进展．积累了丰富的资料。有效的疫苗接种是目前大多数国家控制本病流行的重要措施。在过去的十年中，人们重点构建基因工程疫苗，但效果不一。灭活苗或弱毒活苗虽然仍显示着良好的优势，但一种安全、有效新型疫苗的研制已成为必然趋势。由于S蛋白是TGEV的主要抗原蛋白，近年来利用基因重组技术表达S蛋白从而在动物体内产生免疫抗体，成为TGEV疫苗研究的热点。 S基因的特点： 1、S基因全长约为4300bp，由其合成的S蛋白为1447个氨基酸。 2、S蛋白共有11个抗原决定簇，其中5个是与中和作用相关的重要抗原决定簇。 3、S蛋白携带主要的B 淋巴细胞抗原决定簇，是惟一能诱导产生中和抗体和提供免疫保护作用的结构蛋白 。 4、S蛋白具有细胞膜融合作用，使病毒核蛋白进入细胞浆 。 2、材料和方法 3、结果 病毒引起的细胞病变 ： RT-PCR的结果： 利用设计的一对引物，通过两步法RT-PCR扩增出基因。通过凝胶电泳分析（如下图所示），扩增出的基因约为4300bp，说明已成功扩增出目的基因。 测序结果： 测序结果显示，TGEV S基因全长为4344bp。 S基因的基因进化树： 从GenBank中选出5种不同地方分离株的S基因核苷酸序列，采用DNAstar分析软件进行建树分析，绘制出S基因系统树。 S基因的同源性分析结果： 结果显示，TH-98株与美国的PUR46-MAD、日本的TOY56-165、韩国的KT2, KT3、河南的HN2002、陕西的TSX、黑龙江的HR、EP2316960、WO2007062851株的核苷酸同源性分别为99.6%、98.1%、98.2%、98.3%、97.9%、95.7%、99.7%、99.4%、99.4%。 4、结论 1.运用基本的病毒鉴定方法和RT-PCR技术成功地鉴定出猪传染性胃肠炎病毒。 2. 测序结果表明，TGEV TH-98株的S基因克隆成功，并进行了序列分析。同源性分析结果表明，不同来源的毒株，S基因核苷酸的同源性较高 致 谢 * * 姓 名： 温朋飞 班 级： 动物医学092班 指导教师： 何雷 ◆细胞培养 本实验采用的细胞是ST细胞。 （1）细胞的复苏 （2）细胞的传代 ◆病毒接种及细胞病变观察 ◆病毒RNA的提取 ◆目的基因cDNA的合成 ◆目的基因的PCR扩增 ◆目的基因的序列测定 ◆建立S基因的基因进化树，并进行同源性分析。 正常的ST细胞对照 接毒36h后的ST细胞 ◆大学本科的学习生活即将结束。在此，我要感谢所有曾经教导过我的老师和关心过我的同学，他们在我成长过程中给予了我很大的帮助。本文能够顺利完成，要特别感谢我的导师何雷老师，感谢各位学院的老师的关心和帮助。 ◆最后向所有关心和帮助过我的人表示真心的感谢。 * * *