乙型肝炎病毒聚合酶基因重组腺病毒表达系统的构建和初步鉴定.pdfVIP

• 166. 广东医学双脚年2 月第30 卷第2 期 Gua吨:doøg Mediω1 Journal Feb. 2棚， Vol. 30 , No. 2 晶石出研究 乙型肝炎病毒聚合酶基因重组腺病毒表达 系统的构建和初步鉴定* 李晖，彭前A ，王战舍，周彬，余地健，正程，侯金林 南方医科大学南方医院感染内科(广州 510515 ) {摘要} 目的 构建乙型肝炎病毒聚合晦阁(RT/RNaseH 区段)腺病毒农i态系统并初步接定其转录表达。 方法 采用 PCR 方法从pVC19 - 1. 24HBV 质粒中扩增即:lRNaseH 区段，将该片段与 pCMV -Tag2B 载体连接构 建腺病毒穿梭载体，将其在向5183 细商中交组，获得的才在纽质幸在转染到 Ad293 细胞中包装，待细胞裂解后收集合 病毒的上清并感染 Huh7 细胞，48 h 后通过民T-PCR 鉴定阔的基因转录。结果 成功扩增 HBV RT 区并插入 pC­ MV -Tag2B 载体，成功获得腺病毒才在纽质粮并在 AD293 中包装成病毒颗糕，病毒颗私感染 Huh7 细胞后 RT-PCR 可以在 Hul仔细胞中检测到 HBV RT 区段 mRNA 转录。结论 成功构建乙型肝炎病毒聚合酶~因 RT/RNaseH 区 段的腺病毒表达系统，该系统能在 Huh7 细胞中转录，但i运转录条白的表达仍待进一步检测。 [关键词] HBV; 聚合酶; j世纽腺病毒 lω Construction and identification of the recombinant adenoviral expr sing sy脚m wi伽 hepatitis B virus reverse polymerase gene U Hu户 • PENG Jie , WANG Zhan hui , ZHOU Bin , YU Zhi - fi础， WAN(二 Cheng. HOU Jm 申 lin. 命 Departmerú of I1呐ct印刷刷sea.ye ， Nan -fang Hospital (扩 Soωhem Medical University, Guangzhou 510515 , China Co附spondin.g ωhor: PENG Jie , Tel: ∞86 斗。 ， E - rrw,ü: pjie@fimmu. con ( Abstrad ] 0时ective To construct the adenoviral expressing system of hepatítis B virus reverse polymerase gene (RT/RnaseH domain) and identify the transcription of this system ín Huh7 cells. Methods HBV/P( RT/RNAa制日) gene fragment w倒 ampHfied from pUC19 -1. 24HBV and subs叫uently inserted into pCMV - T何2 vector. pCMV - T略2 RT/RNAaseH v创tor w制 recombined after transformed into Bj5183 bacterium. The recombinant plasmíds extracted from BjS183 bacterium was transf.时ted into Ad293 cells and encapsidated into adenovirus particles. The adenovirus in the 8U- pernatant of Ad293 cells was collected and used to infect Huh7 cells. Mter 48h. the transcription of HBV/P gene (RT/ RnaseH domain) was detect叫 b