9.HPLC注意事项.pdf

高效液相色谱(HPLC)简介 高效液相色谱(HPLC)简介 高高效效液液相相色色谱谱((HHPPLLCC))简简介介 1 . 一高效液相色谱法 高效液相色谱法系采用高压 高效液相色谱法系采用高压 高高效效液液相相色色谱谱法法系系采采用用高高压压 输液泵将规定的流动相泵入 输液泵将规定的流动相泵入 输输液液泵泵将将规规定定的的流流动动相相泵泵入入 装有填充剂的色谱柱，对供 装有填充剂的色谱柱，对供 装装有有填填充充剂剂的的色色谱谱柱柱，，对对供供 试品进行分离测定的色谱方 试品进行分离测定的色谱方 试试品品进进行行分分离离测测定定的的色色谱谱方方 法。注入的供试品，由流动 法。注入的供试品，由流动 法法。。注注入入的的供供试试品品，，由由流流动动 相带入柱内，各组分在柱内 相带入柱内，各组分在柱内 相相带带入入柱柱内内，，各各组组分分在在柱柱内内 被分离，并依次进入检测 被分离，并依次进入检测 被被分分离离，，并并依依次次进进入入检检测测 器，由积分仪或数据处理系 器，由积分仪或数据处理系 器器，，由由积积分分仪仪或或数数据据处处理理系系 统记录和处理色谱信号 统记录和处理色谱信号 统统记记录录和和处处理理色色谱谱信信号号。 2 HPLC 的组成 — — — — — — 流动相 过滤器 泵 进样器 色谱柱 检测器 废液瓶 柱温箱 记录仪 3 �HPLC的环境设置： HPLC的日常操作条件：温度：10～30℃；相 对湿度80％； 最好是恒温、恒湿，远离高 电磁干扰、高振动设备，有良好的通风设施。 4 流动相 乙腈：色谱醇 � 乙腈：色谱醇 乙乙腈腈：：色色谱谱醇醇 甲醇：等度洗脱：色谱醇，也可用分析醇 甲醇：等度洗脱：色谱醇，也可用分析醇 � 甲甲醇醇：：等等度度洗洗脱脱：：色色谱谱醇醇，，也也可可用用分分析析醇醇 梯度洗脱：色谱醇 梯度洗脱：色谱醇 梯梯度度洗洗脱脱：：色色谱谱醇醇 水：纯化水、注射用水或娃哈哈纯净水（不能 水：纯化水、注射用水或娃哈哈纯净水（不能 � 水水：：纯纯化化水水、、注注射射用用水水或或娃娃哈哈哈哈纯纯净净水水（（不不能能 被微生物污染） 被微生物污染） 被被微微生生物物污污染染）） 流动相使用前必须用G4漏斗或0.45微米的微孔滤膜过滤。 流动相使用前必须用G4漏斗或0.45微米的微孔滤膜过滤。 � 流流动动相相使使用用前前必必须须用用GG44漏漏斗斗或或00..4455微微米米的的微微孔孔滤滤膜膜过过滤滤。。 流动相使用前必须脱气。（抽真空或超声） � 流动相使用前必须脱气。（抽真空或超声） 流流动动相相使使用用前前必必须须脱脱气气。。（（抽抽真真空空或或超超声声）） 流动相必要时需测其紫外吸收光谱，应在测定波长处无很大吸 � 流动相必要时需测其紫外吸收光谱，应在测定波长处无很大吸 流流动动