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第10章 紫外-可见分光光度法 及分子荧光分析法 10.1 紫外－可见吸收光谱 10.2 朗伯－比尔定律 10.3 紫外－可见分光光度计 10.4 紫外－可见分光光度法的灵敏度与准确度 10.5 分析条件的选择 10.6 紫外-可见分光光度法的应用 10.7 分子荧光分析法简介 1 化学分析与仪器分析方法比较 化学分析：常量组分(1%), Er : 0.1% ～ 0.2% 准确度高 依据化学反应, 使用玻璃仪器 仪器分析：微量组分(1%), Er : 1%～5% 灵敏度高 依据物理或物理化学性质, 需要特殊的仪器 例: 含Fe约0.05%的样品, 称0.2 g, 则m(Fe)≈0.1 mg 重量法 m(Fe O ) ≈0.14 mg, 称不准 2 3 容量法 V(K Cr O ) ≈0.02 mL, 测不准 2 2 7 光度法 结果0.048%～0.052%, 满足要求 2 仪器分析方法分类 1. 光学分析法: 基于电磁辐射与物质的相互作用. 非光谱法 （折射法，浊度法，旋光法） 光 （不以光的波长为特征讯号） 学 分子光谱法: UV-Vis, IR, MFS, MPS 分 光谱法 析 原子光谱法: AAS, AES, AFS 法 （以光的吸收、发射等作用而建立的分析方法，通过 检测光谱的波长和强度来进行定性和定量的方法） 2.电化学分析法: 依据物质的电化学性质及其变化 3.色谱法: 气相色谱, 液相色谱 4.质谱法、热分析法、放射化学法等 3 分子光谱学 紫外-可见分光光度法(UV-Vis) Ultra Violet-Visible Spectrophotometry 红外吸收光谱法(IR) Infrared Spectroscopy 分子荧光光谱法(MFS) Molecular Fluorescence Spectroscopy 4 分子磷光光谱法(MPS) Molecular Phosphorescence Spectroscopy 光声光谱法 (PAS) Photo Acoustic Spectroscopy 拉曼光谱法 (RS) Raman Spectroscopy 核磁共振波谱法(NMR) Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy 质谱法 (MS) Mass Spectroscopy 发展联用技术是趋势! 5 10.1 紫外－可见吸收光谱 吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有 选择性吸收的特性而建立起来的分析方法. 特点 – 灵敏度高：测定下限可达10-5～10-6 mol·L-1, 10-4 %～10-5 % – 准确度能够满足微量组分的测定要求： 相对误差2 %～5 ％ （1 %～2 ％） – 操作简便快速 – 应用广泛