基因工程第3章2：操作技术.pptVIP

Chapter three Techniques of genetic engineering 六. Different ramificate(衍生的）methods of PCR 1、热启动PCR是除了好的引物设计之外，提高PCR特异性最重要的方法之一。 原因：尽管Taq DNA聚合酶的最佳延伸温度在72℃，聚合酶在室温仍然有活性。因此，PCR反应体系配制过程中，以及在热循环刚开始，保温温度低于退火温度时会产生非特异性的产物。这些非特异性产物一旦形成，就会被有效扩增。 ???? 对策： 限制Taq DNA聚合酶活性的常用方法是在冰上配制PCR反应液，并将其置于预热的PCR仪。这种方法简单便宜，但并不能完成抑制酶的活性，因此并不能完全消除非特异性产物的扩增。 热启动通过抑制一种基本成分延迟DNA合成，直到PCR仪达到变性温度。 包括延缓加入Taq DNA聚合酶; 使用蜡防护层将一种基本成分，如镁离子或酶，包裹起来，或者将反应成分，如模板和缓冲液，物理地隔离开。在热循环时，因蜡熔化而把各种成分释放出来并混合在一起; 聚合酶的活性需经过 95 ℃ 10mins 的高温造成化学修饰基团的脱落，然后才有聚合的活性. 2、Touch-down PCR 7、多重PCR 多重PCR（multiplex polymerase ch