牦牛嵴病毒PCR检测方法的建立及其应用.docxVIP

牦牛嵴病毒PCR检测方法的建立及其应用马英俊(西南民族大学 生命科学与技术学院 四川 ，成都 610041)摘要:本研究根据GenBank上牦牛嵴病毒核普酸序列设计了一对特异性引物，建立牦牛嵴病毒的PCR检测方法。该方法特异性强，敏感度高，重复性好。应用该PCR方法对2010年在上海周边地区采集的116份猪粪样品进行检测，结果45份为牦牛嵴病毒阳性，表明上海地区牛群中牦牛嵴病毒相当流行。本研究建立的PCR方法可以用于牦牛嵴病毒的流行病学监测。关键词:牦牛嵴病毒;聚合酶链式反应;检测Development and Application of a PCR Assay for Detection of PorcineKobuvirusWangChangsong } LanDaoliang } HuaXiuguoAbstract: Porcine kobuvirus } an emerging RNA virus } was first identified from stool specimens of clinically healthy domestic pigs in2007 in Hungary. To evaluate the prevalence of porcine kobuvirus in Shanghai of China a couple of primers were designed based onporcinekobuvirus sequence deposited into GenBank and a PCR assay was developed for detection of porcine kobuvirus. The resultsindicated that the assay was specitic} sensitive and reproducible. In addition high prevalence of porcine kobuvirus was detected in 45out o f 116 clinical samples from several regions around Shanghai. The PCR method could be used as a diagnostic technique for theepidemiological surveillance of porcine kobuvirusKeywords: porcine kobuvirus; PCR; detection牦牛嵴病毒（Porcine kobuvirus）是一种新发现的RNA病毒属微核糖核酸病毒，是一类没有囊膜的单股正链RNA病毒，共包含12个种属，分别为口蹄疫病毒属（Aphthovirus），禽肝病毒（Avihepatovirus），心病毒属（Cardiovirus），肠病毒属（Enterovirus），马鼻病毒属（Erbovirus），肝病毒属（Hepatovirus），双埃柯病毒（Parechovirus），扎幌病毒属（Sapelovirus），塞内卡病毒属（Senecavirus），捷申病毒属（Teschovirus），震颤病毒属（Tremovirus）和嵴病毒属（Kobuvirus）[1]。牦牛嵴病毒为嵴病毒属（Kobuvirus）成员。到目前为止，嵴病毒属至少包含三种病毒：爱知病毒、牛嵴病毒和暂定命名的牦牛嵴病毒。爱知病毒于1991年在日本爱知县患有急性胃肠炎的病人粪样中首次分离得到[2]；牛嵴病毒于2003年在日本的牛粪和血清中首次分离到[3]，且两者都已经被国际官方确认。牦牛嵴病毒于2007年在匈牙利健康牦牛粪样品中首次被发现后[4]（同期在中国也有报道[5]相继在泰国[6]、日本[7]、韩国[8]、巴西和荷兰[9]等国被发现，阳性率相对较高。并且发现在具有腹泻症状的牦牛群中，阳性率明显高于无腹泻症状的牦牛群。目前，牦牛嵴病毒是否与肠道疾病有关，尚不清楚。但由于检出率相对较高，可能与其他肠道病毒发生混合感染或是疾病发生的诱导因素，甚至有可能对动物乃至人类健康造成潜在的威胁。因此，及时加强牦牛嵴病毒的研究有重要的现实意义及科学意义。在2010年采集上海周边地区牦牛群中的大量牦牛粪样品，通过RT-PCR对牦牛群中的嵴病毒进行鉴定，并进行了序列分析，以确定上海市牦牛群中是否存在牦牛嵴病毒感染以及感染率，为相关疫病的诊断与预防提供新的依据。同时，致力于建立一种检测牦牛嵴病毒的PCR方法，为以后调查牦牛嵴病毒在我国的流行提供一种有效的诊断技术保障。1　材料与方法1.1　对照毒株与样品采集　TGEV（牦牛传染性胃肠炎病毒）、PEDV（牦牛流行性腹泻病毒）、PRV（牦牛