单链DNA结合蛋白2对小鼠胚胎干细胞向滋养层方向分化的作用.pdf

上 海 交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vo1．36 NO．3 Mar．2016 JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(MEDICALSCIENCE) ·3l3 · 论 著 基础研 究 单链 DNA结合蛋 白2对小鼠胚胎干细胞 向滋养层 方 向分化 的作用 刘吉锋 ， 李 慧 上海交通大学 医学院分子发育生物学实验室，上海 200025 [摘要] 目的 寻找并鉴定可促进小 鼠胚胎干细胞 (Es细胞)向滋养层方 向分化的新基 因。方法 优化小 鼠 Es细胞 向滋养层方 向分化 的诱导条件 ，结合数据分析寻找在此分化过程 中表达上调 的基 因，由此发现 了单 链 DNA结合蛋 白2(Js6p2)。通过 qRT—PCR检测 6p2在小 鼠Es细胞 向滋养层方 向分化过程 中的表达变 化，并检测s6p2在小鼠早期胚胎对应的3种细胞类型中的表达模式。克隆ss6卢2基因并将其在小鼠Es细胞 中过表达，观察细胞形态并检测其是否具有促进小鼠Es细胞向滋养层方向分化的功能。结幕 通过尝试不 同的组合 ，发现在无血清的小 鼠滋养层干细胞 (Ts细胞)基础培养液 中添加 BMP4联合 bFGF既可诱导小 鼠 Es细胞中滋养层标记基因的显著上调 ，又可有效抑制 中胚层标记基因的上调 。通过表达模式分析发现 ，在 诱导小 鼠Es细胞 向滋养层方 向分化过程 中Jss 2的表达量发生 了显著上调 ，并且 s6P2在 Ts细胞 中高表 达。当在小 鼠Es细胞 中过表达 S6P2之后 ，ES细胞发生 了一定程度 的分化 ，并且滋养层相关 的标记基 因发 生 了最为显著的上调。结论 2具有促进小 鼠Es细胞向滋养层方 向分化的作用 。 [关键词]胚胎干细胞 ；滋养层 ；分化 ；单链 DNA结合蛋 白2 [D0I]10．3969／j．issn．1674_8115．2016．03．001 [中图分类号]R393 [文献标志码]A Effectsofsingle—strandedDNA bindingprotein2ontrophoblastic differentiation inm ouseembryonicstem cells LIU Ji—feng，LIHui Lab MolecularDevelopmentalBiology，ShanghaiJiaoTongUniversitySchool Medicine，Shanghai200025，China 【Abstract】Objective Toidentifynovelgenespromotingtrophoblasticdifferentiationinmouseembryonicstem (ES)cells． Methods InducingconditionsfortrophoblasticdifferentiationinmouseEScellswereoptimized． Combinedwithdataanalysis，significantlyup-regulatedgenesduringthisdifferentiation processwereidentified andsingle-stranded-DNAbindnigprotein2 (ssbp2)wasdiscoveredasacandidategeneinvolvedintrophoblastic differentiation．ChangesinS曲僻 expressionduringhteprocessoftrophoblasticdifferentiationinmouseEScells，