第六章_固定化细胞发酵产酶.ppt

第六章 固定化细胞、动植物细胞发酵产酶 第一节 固定化细胞发酵产酶 一、固定化细胞发酵产酶的工艺条件及其控制 1、固定化细胞的预培养 采用生长培养基和适合细胞生长的工艺条件 2、溶解氧的供给 加大通气量 3、温度的控制 培养基进入反应器之前，必须预先调节至适宜的温度。 4、培养基组分的控制 注意培养基组分对固定化载体的影响 二、固定化原生质体发酵产酶的工艺条件及其控制 1、渗透压的控制 2、防止细胞壁再生：添加青霉素等抑制细胞壁生长的物质 3、保证原生质体的浓度：制备固定化原生质体时，应保证原生质体的浓度达到一定的水平。 第二节 动植物细胞发酵产酶 二、植物细胞发酵的特点 至今为止，植物来源的天然物质的生产几乎都是采用提取法。即首先收集植物（栽培的或野生的），然后采用各种生化技术，把有用的物质从植物组织细胞中提取分离出来。提取法工艺路线复杂，加上植物的栽培和生长受到地理环境和气候条件的影响，难以满足人们需要。尤其是野生植物资源越来越少，栽培条件又受到各种限制。 植物细胞发酵技术首先从植物组织中选育出植物细胞，再经过筛选、诱变、原生质体融合或DNA重组等技术而获得高产、稳定的植物细胞。然后，用植物细胞在人工控制条件的植物细胞反应器中，进行发酵获得各种所需的产物。 特点： ① 提高产率 发酵液中紫草宁的含量达到细胞干重的14%，比紫草根中紫草宁含量高10倍。 ② 缩短周期 植物细胞生长的倍增时间一般为12-60h，发酵周期10-30天，与植物生长周期比较，大大地缩短了生产周期。 ③ 易于管理，减轻劳动强度 植物细胞发酵再人工条件下进行工业化生产，不受地理环境和气候条件等的影响，易于操作管理，大大地减轻了劳动强度，改善了劳动条件。 ④ 提高产品质量 植物细胞发酵生产的产物比较单一，主要产物浓度较高，加上在工厂生产，可以减轻环境中各种有害物质（如农药、农肥）的污染以及微生物、昆虫等的侵蚀，产品易于分离纯化，从而提高产品质量。 三、植物细胞发酵产酶的工艺条件控制 （1） 植物细胞生长和发酵所使用的培养基 植物细胞生长和发酵培养基与常用的微生物培养基有较大差别。最主要的不同点在于： ①植物细胞生长和发酵需要大量的无机盐，除了大量元素外，还需要有B、Mn、Zn、Mo、Cu、I等微量元素 ②植物细胞需要多种维生素和植物激素 ③植物细胞要求的氮源一般为无机氮源 ④植物细胞一般以蔗糖为碳源。 （2）温度和pH值 植物细胞培养的温度一般控制在室温范围（25℃左右）。温度稍为升高，则对细胞生长有利；而对次级代谢物的积累而言，温度低些为好。即，有些植物细胞的最适生长温度和最适发酵温度有所差别。 植物细胞培养的pH值，一般在微酸性范围，即pH值5-6。培养基配制时，pH值一般控制在5.5左右。 （3）通风与搅拌 植物细胞的生长和发酵需要吸收一定的溶解氧。溶解氧的供给一般要通过通风和搅拌。适当的通风搅拌还可以使细胞不至于凝聚成大的细胞团，以使细胞分散，分布较均匀。然而由于植物细胞代谢较慢，需氧量不多，过量的氧气反而会带来不良影响，加上植物细胞体积大、较脆弱，对剪切力敏感，所以通风和搅拌不能太强烈。 （4）前体的添加 为了提高植物细胞生产次级代谢物的产量，在培养基中添加代谢物的前体或中间产物是有效的方法， （5）刺激剂的作用 植物细胞要在一定条件下，才会产生并积累次级代谢物。为了提高次级代谢物的产率，在培养基中添加适当的刺激剂是行之有效的途径。刺激剂可以促使植物细胞中的物质代谢朝次级代谢物生成的发向进行，从而强化次级代谢物的生物合成。常用的刺激剂有微生物细胞壁碎片和微生物胞外酶。 四、动物细胞发酵 随着基因工程的发展，已可以将某些动物蛋白质所对应的基因通过克隆技术转移到微生物细胞中进行表达。如生长激素、干扰素、胰岛素等已取得巨大成功。 动物细胞与其它细胞的最大区别，在于没有细胞壁，显得十分脆弱，必须小心控制温度、pH值、渗透压以及溶解氧等外界条件。例如，温度控制要严密，允许温度波动范围在±0.25℃之内；pH值的调节要采用较温和的NaHCO3缓冲液；采用氧气、氮气、二氧化碳和空气四种气体的不同比例来控制培养液值中的溶解氧水平，并通过非直接通气搅拌的方式进行供氧，并要严格控制渗透压。 动物细胞的营养要求比微生物细胞和植物细胞都复杂得多。其中培养基中需要加入氨基酸、维生素、葡萄糖、激素、无机盐，还需加入血清或其代用品等，所以动物细胞培养成本较高，主要用于珍贵药物的生产。 * * 激素，疫苗，单克隆抗体，酶 色素，香精，药物，酶等次级代谢物 醇类，有机酸，氨基酸，抗生素，酶，核苷酸 主要产物 敏感 敏感 大多数不敏感 对剪切力 复杂 简单 简单 营养要求 15 12 0.3~6 倍增时间（h） 10~100 20~30