红细胞生成调节.ppt

造血祖细胞培养主要应用于： 1）检测造血祖细胞在骨髓、外周血和脐血中的数量 2）研究体外造血祖细胞类型、特性及生理意义 3）利用人工培养条件易于改变并能严格控制的特点，研究造血调节； 4）用于造血系统疾病发生机制，诊断、预后判断、疗效观察及治疗药物的选择等方面的研究。 一、造血干／祖细胞体外培养的基本条件 （一）实验室条件 （二）培养的支持物 （三）营养液 （四）细胞因子 （五）血清 二、造血干／祖细胞体外培养 各种造血祖细胞的培养条件、体系组成虽有差异，但培养过程大致相同。 造血祖细胞的培养步骤如下： （1）分离培养细胞，并制成单个核细胞悬液。 （2）配制培养体系：按比例将培养液、细胞、血清、刺激因子加入培养体系瓶内，混匀。 （3）将配制的培养体系在37℃水浴，保温10min。 （4）培养体系保温的同时，将琼脂等支持物煮沸融化（甲基纤维素不需加热）。 （5）待支持物降至40℃左右，加入培养体系并混匀。 （6）将混匀后的培养体系加入培养皿或培养板孔内，一般平行做3份。 （7）待培养物冷却凝固后，于5%CO2、饱和湿度及37℃温箱内孵育。CFU-GM需7~10天，CFU-E需7天，BFU-E需14天。 （8）观察结果。包括记数集落数，对部分难以确定细胞性质的集落应固定、染色后分析。 （一）粒一单核细胞系祖细胞（CFU-GM）培养 【原理】受检者血液或骨髓经过分离获得的单个核细胞在适当的细胞因子(GM-CSF)作用下，在体外半固体琼脂上形成由不同成熟阶段的粒细胞和单核细胞组成的细胞集落。每个集落可视为由一个粒一单核细胞系祖细胞增殖、分化而来。集落数的多少可以反映造血细胞中粒一单核细胞系祖细胞的水平。 （二）红系祖细胞（BFU-E,CFU-E）培养 【原理】在培养体系中加人适量的EPO，使骨髓中的造血细胞在半固体培养基上形成由红细胞组成的集落（BFU-E和CFU-E）。每个集落可视为一个红系祖细胞增殖分化而来，集落的多少可反映造血细胞中红系祖细胞的量。 Thank you ！ （一）造血细胞生长发育的概念 造血细胞的生长发育包括增殖、分化、成熟和释放四个方面。 造血细胞的增殖是指血细胞通过分裂而使其数量增加的过程。 有丝分裂是造血细胞的主要增殖方式。 母细胞有丝分裂后形成的子细胞同时都倾向分化成熟。 子细胞还可进一步增殖，每增殖一次就越倾向于进一步分化。 一般来讲，一个原始细胞到成熟细胞可经过4~5次分裂，如1个原始红细胞可产生32个或64个成熟红细胞。 而巨核细胞的增殖（连续双倍增殖DNA）与其他系统血细胞的增殖方式不同，每增殖一次，核增大一倍，但胞质并不分裂，属多倍体细胞，形态上也表现为从原始到成熟胞体逐渐变大。 造血细胞的分化（differentiation） 是指细胞发育过程中失去某些潜能又获得新的功能的过程，即由多潜能转变为单潜能的过程。 分裂后的细胞在形态和功能上产生了新的特征，分化过程是不可逆的。 造血细胞的成熟（maturation） 是细胞从造血干细胞定向分化后，从原始经幼稚到成熟的细胞发育过程， 血细胞越成熟其形态越易辨认，功能也日趋完善。 成熟的血细胞在骨髓内通过“髓血屏障”释放入血循环中，各种调节因素控制着血细胞的增殖、分化、成熟和释放，从而维持血细胞数量和质量的稳定。 （二）造血细胞生长发育的过程 根据造血细胞的功能和形态特征， 造血细胞的生长发育过程可为： 造血干细胞、造血祖细胞、原始及幼稚细胞三个阶段。 原始及幼稚细胞阶段的细胞是在骨髓涂片中从形态学上可以辨认各系各阶段的血细胞。 造血干细胞阶段 造血组细胞阶段 原始及幼稚细胞阶段 成熟细胞 二、造血干／祖细胞 干细胞（stem cell）是具有自我复制和多向分化能力的细胞。 早期胚胎中的原始生殖细胞即胚胎干细胞，具有广泛的发育和分化潜能，称为全能干细胞（totipotent hematopoietic stem cell,T HSC）。 胚胎干细胞可分化为各类组织干细胞，造血组织中存在造血干细胞、血管干细胞和间质干细胞。 （一）造血干细胞 造血干细胞（hematopoietic stem cell, HSC）的概念于20世纪初就有人提出，但当时的含义不甚明确，研究内容模糊不清，直至发现了脾集落形成单位之后，造血干细胞在六七十年代引起了人们的关注。 随着新技术的发展，造血干细胞在临床应用等方面潜在的巨大价值被逐步发现，目前已成为生命科学研究领域的热门课题。 造血干细胞又称多能干细胞，由中胚层细胞分化而来，是各种血细胞的始祖，具有高度自我更新、多向分化和增殖能力，并且在造血组织中含量极少，其形态酷似小淋巴样细胞而难以辨认。 在体内造血干细胞多数处于Go期。 造血干细胞可增殖分化为髓系干细胞和淋巴干细胞。 1.造血干细胞的基本