三萜类化合物的研究现状.ppt

三萜类化合物的研究现状 对于三萜类化合物，国内外学者都在对其进行尽量详细的研究，而从近些年的研究成果来看其研究重心主要集中在新化合物的发现，分离提取方法以及对其生理活性的探索三个方面。其中对三萜类化合物的分离提取方法的研究日渐成熟。传统的分离方法需要消耗大量的有机溶剂易造成医药污染，且提取的选择不高，不利于中药的现代化。近年来由于色谱等分离技术、波谱测定技术等分析手段的迅速发展，三萜类化合物的提取分离方法也取得了显著进展。目前常用于三萜类化合物分离提取的方法主要有超临界流体萃取法(SFE)、半仿生提取、超声循环技术 、化学衍生法等。 三萜类化合物的研究现状 对三萜类化合物生理活性的探索也是一直以来三萜类化合物研究的重点。三萜类化合物具有广泛的生理活性，通过对其生物活性及毒性研究结果显示，它具有抗溶血、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、降低胆固醇、杀软体动物、抗生育等活性，其中抗肿瘤活性日益成为研究的热点，已有众多学者通过动物体内实验及体外细胞培养实验对其这方面功能进行了研究。随着近年各国学者对三萜类化合物研究的深入，其多种多样的抗肿瘤机制也逐渐被揭示。研究证明其作用机制主要通过抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，诱导肿瘤细胞分化来发挥抗肿瘤活性。 研究内容 研究材料 本项研究以杏鲍菇为实验材料，杏鲍菇(Pleurotus eryngii)即刺芹侧耳，是一种大型的肉质伞菌，属担子菌纲，伞菌目，侧耳科，侧耳属，是开发不久的一种珍稀食用菌，具有杏仁和鲍鱼的味道，脆嫩鲜美，品质极好，别称为“平菇王”。目前，已有的研究结果显示，食用菌中含有多种活性成分，亦具有提高人体免疫力、抗肿瘤、增强肝功能、抗氧化等多种功效。 技术路线 技术路线 1 分离纯化 建立分离纯化的过程，确立每步实验所采用的试验方法，尽可能分离提纯杏鲍菇中的三萜类化合物，并测定其结构，明确分离过程中得到的其他物质的种类。 分离纯化 1.1分离纯化的基本思路 分离纯化 1.1.1 三萜类化合物的粗提（溶液浸提法） 原理 利用多糖溶于水或酸、碱、盐溶液而不溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂和三萜类化合物难溶于水，易溶于有机溶剂的特点进行提取。 分离纯化 1.1.2三萜类化合物的精提 分离纯化 为了达到更好的分离效果，可以在进行萃取之前进行超声波处理，使三萜类化合物尽量溶解于溶剂中。 分离纯化 1.1.3 三萜类化合物的纯化 分离纯化 1.1.4三萜类化合物的纯化 在三萜类化合物纯化过程中，可以单独采用上述一种方法，也可以多种方法一同采用。为使实验结果尽可能可靠，在本项研究中，设想将硅胶柱色谱法、高效液相色谱和高速逆流色谱法（HSCCC）联合使用。 分离纯化 1.1.5 三萜类化合物的纯化 分离纯化 乙酸乙酯萃取物经由硅胶色谱和高效液相色谱分离后得到三萜类化合物和其他物质，鉴别其他物质的种类，并对三萜类物质进行结构和活性方面的测定。 HPLC的相关参数: 色谱柱：RP—C18：Diamonsil—C18，5 ，olumnSize 4.6×250nm； 色谱条件：检测波长258nm,谱带宽度16,参比波长360 nm,谱带宽度100，样品浓度1 mg／mL，进样量1O L，流速0.8 ml／min，柱温4O℃； 流动相：5％醋酸一甲醇(45：55) 技术路线 2 抗氧化、抗菌活性的测定 用ABTS法测定从杏鲍菇中提纯的三萜类化合物的抗氧化能力，并测定其对·OH自由基，DPPH的清除效率及其还原力，以此表征其抗氧化能力，并对三萜类化合物分别测定其抗细菌火星和抗真菌活性。 抗氧化活性 2.1检测抗氧化活性的指标 抗氧化活性 2.1.1还原力的测定 原理 样品将铁氰化钾(K3Fe(CN)6 )还原成亚铁氰化钾(K4Fe(CN)6 )，亚铁氰化钾再与Fe3+作用，生成亚铁氰化铁(普鲁士蓝)，以在700nm 波长处检测普鲁士蓝的吸光度表示还原力的大小，吸光度越高，样品的还原力就越强。 2.1.2ABTS法 ABTs经氧化后生成稳定的蓝绿色阳离子自由基ABTs+·，能溶于水相或酸性乙醇介质中，在414、645、734和815nm处有最大吸收。 抗氧化活性 2.1.3对·OH自由基清除作用 原理： FeSO4与H202反应产生·OH，以·OH 氧化水杨酸所得产物的吸光值表示·OH 的多少，吸光值越大，·OH越多。 2.1.4对DPPH的清除作用 根据DPPH自由基有单电子，在5