第6章- 高效毛细管电泳.pdfVIP

• 1937年，瑞典科学家蒂塞利乌斯 （Tiselius）设计了世界上第一台电泳仪， 建立了移界电泳法，用于牛血清中分离 血清蛋白、α-、β -和γ -球蛋白，并于 1948年荣获诺贝尔化学奖。 多年以来，电泳技术围绕制胶、电泳、染 色三个技术环节，不断改进，以实现下 列目标： 1、提高分辨率及灵敏度。 2、简化操作，缩短电泳时间。 3、扩大应用范围。 • 各类电泳技术已广泛应用于生命科学 • 毛细管电泳(CE)又称高效毛细管电泳(HPCE) ， 是指离子或带电粒子以毛细管为分离介质，以 高压直电场为驱动力，依据样品中各组分之间 淌度和分配行为上的差异而实现分离的液相分 离分析技术。 • 采用了0.05 mm内径的毛细管； • 采用了高达数千伏的电压。 传统电泳与毛细管电泳的区别： 传统电泳：受到焦耳热的限制，只能在低电场强 度下进行电泳操作，分离时间长，效率低。 毛细管电泳：毛细管电泳(CE)又称高效毛细管电泳 (HPCE) ，是指离子或带电粒子以毛细管为分离室, 以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间 淌度上的差异而实现分离的液相分离分析技术。由 于毛细管内径小，表面积和体积的比值大，易于散 热，因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生，这是 CE和传统电泳技术的根本区别。 4 同：均为液相分离分析方法。 可用相同的理论来描述（差速迁移），一些色谱名词概念，如： 塔板理论、速率理论、保留值等仍可使用。 异：分离原理不同； 仪器构造有很大的差异。 HPLC示意图 CE示意图 5 三、毛细管电泳的特点和分类 （一）毛细管电泳的特点 1 、毛细管电泳柱效更高 ，塔板数可达 5 6 10 ~10 /m， （又称高效毛细管电泳，HPCE）； 2、分离速度更快； 3、溶剂、试样消耗极少， （纳升级）； 4、仪器成本低， （不需要高压泵）； 5、选择性高。通过选择操作模式和缓冲溶液的成 分以达到对性质不同的成分的有效分离。 6、应用广泛。特别适用于氨基酸、多肽、蛋白质 和核酸等生命科学领域的测定，以后逐渐被广泛应用 于生物，化学，医药，环保等领域。与HPLC互相补充， 共同成为分析化学中重要的分离分析技术。 6 （二）毛细管电泳的分类 按毛细管中填充物的性质分类： 自由溶液 毛细管内填充物为pH缓冲的电解质 溶液。如：毛细管区带电泳 （CZE）。 非自由溶液 毛细管内填充物为凝胶或其他筛 分介质。如：毛细管凝胶电泳 （CGE）。 按分理机制分类： 电泳型: CZE、CGE、NACE （非水） 色谱型: 胶束电动毛细管色谱（MECC） 微乳液电动毛细管色谱（MEECC） 电泳/色谱型:毛细管电色谱（CEC） 7  （一）基本概念  毛细管总长度(L, cm)  毛细管有效长度(l, cm) 毛细管的入口端到检测窗口 的距离；  迁移时间(t, min) 带电粒子在电场作用下做定向移动 的时间；  电泳速度（v cm/s）在单位时间内，带电粒子定向 移动的距离；  电场强度(E, V/cm) 电场强度/毛细管总长度；  电泳淌度（μ cm2/(V·s) ）带电粒子在毛细管中定 向移动的速度与所在电场强度之比； 一、电泳和电泳淌度 （mobility） 电泳：在