酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理.docVIP

酚氯仿法提取DNA主要步骤： 将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。每个梯度脱水时间为5-10min 将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。 将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。 加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。 离心：12000R，7min，4℃。离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。 吸取上层液体加入新的离心管。 配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。 在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。 离心：12000R，7min，4℃。 吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。 离心：12000R，7min，4℃。 吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。-20℃过夜。 将样品取出，12000R，7min，4℃离心。 弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。 重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。 提取DNA完成。 溴氯仿法提取DNA的原理： 用酚抽