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- 2017-05-17 发布于广东
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高级生物化学与分子生物学
综合实验报告
实验目的
以特定酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达和纯化为主线,进行基因操作、蛋白质表达、亲和层析纯化等的训练,通过集中训练熟练生物化学和分子生物学实验操作,为独立开展研究生课题研究奠定实验基础。
实验原理
利用基因重组技术,将目的基因与载体质粒DNA在体外进行重组,然后把这种重组DNA转化到感受态细胞,通过一定的诱导条件,使之在受体细胞内增值表达相应的目标蛋白。为了得到相应的目标蛋白,需要通过亲和层析等手段纯化目标蛋白。
三、 实验内容
一)内容一:重组质粒的分离、鉴定与转化
实验1. 重组质粒的分离、纯化及检测
实验2. 质粒的酶切及琼脂糖凝胶电泳回收
实验3. 感受态细胞的制备、连接与转化
二)内容二:重组蛋白在大肠杆菌中的表达
实验4. 细菌的大量培养及重组蛋白的诱导
三)内容三:重组蛋白的提取、纯化与鉴定
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