莴苣叶绿体转化体系的初步建立.pdfVIP

Online system: 农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 得《 2014 , 22(4):520-528 DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.04.016 高宦叶绿体转化体系的初步建立 林春晶I 韦正乙l 王云鹏1.2 王月琳1.2 邢少辰H l 吉林省农业科学院农业生物技术研究所，长春 130033; 2 吉林农业大学生命科学学院，长春 130118 *通讯作者，xingsc@ 摘 要 作为人们广泛食用的叶用蔬菜，寓言(Lactucαsαtiva L.)一直被科学家认为是二种理想的植物生 物反应器平台。本研究首先以生产上常用的两个离吉品种美国大速生(Grand Rapid)与香港玻璃生菜 (Hong Kong Glass)的叶片为外植体，放置在添加不同激素成分的培养基中诱导再生小芽，在生根培养基 上生根后即建立了组织培养再生体系:依据两个离宦品种在不同培养基中的诱导再生率、出芽效率和生 根率，确定表现较好的品种美国大速生作为后续叶绿体遗传转化外植体的供体。其次，根据离宦叶绿体 基因组16S-tmI-TmA-23S 区域的序列，设计特异引物，利用PCR扩增技术获得上述区域的部分片段，并 作为同源重组序列插入T载体中:在同源重组序列中的Ecl136 II 酶切位点处，插入带有绿色荧光蛋白基 因也制和ααdA 抗性筛选基因的化学合成表达框，构建适合离宦叶绿体转化的特异表达载体PTLE，其中 表达框内为g命基因，壮观素酶抗性基因(ααdA)具有壮观霉素和链霉素抗性。最后，利用基因枪轰击法将 PTLE载体转化到高宦叶绿体基因组中，在含有30 mgIL壮观霉素的培养基中进行两轮抗性筛选后，PCR 分子检测和绿色荧光观察证明:获得的高宦叶绿体转化植株仍处于杂合状态，还未达到完全同质化的程 度。上述研究结果表明，己经初步建立了高声叶绿体的遗传转化体系，为进一步获得同质化纯合体和后 续的植物生物反应器研究与开发提供了基础资料。 关键词 离宦，叶绿体转化，分子检测，绿色荧光蛋白 The Preliminary Investigation of Chloroplast Transformation in Le1tuce (LαctucαsαtivαL.) 1 1 12 1 1 LIN Chun-Jing WEI Zheng-Yi WANG Yun-Peng • WANG Yue-Lin ,2 XING Shao-Chen 1Agro- biotechnology Research Institu旬， Jilin Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130033, China; 2 School of Life Sciences, Jilin A伊cultural University, Changchun 130118, China *Corresponding al础。r， xingsc@ Abstract As a popular leafy vegetable , lettuce(Lactucα sativa L.) has been considered by scientists to be an ideal platform for plant bioreactor. In the present study, 2 lettuce cultivars(Grand Rapid and Hong Kong Glass) commonly cultivated in the production were evaluated which one was feasible to be served as explants for chloroplast transformation. To do this , the tissue cult