胃蛋白酶原Ⅱ单抗制备及夹心ELISA的初步建立.pdfVIP

动物医学进展.2012.33(4):56-59 Progress în Veterinary Medicine 胃蛋白酶原 H 单抗制备及夹心 ELISA 的初步建立 张红绪1 ，孙青芸l ，王继创Z ，李恒思2 ，张怡青1 ，董彩文3 ，李玉林2 ，刘旺根3 ，景建洲3 ，王云龙μ (1.河南师范大学，河南新乡 453007; 2. 河南生物工程技术研究中心，何南郑州 450021; 3. 郑州轻工业学院，河南郑州 450021;4. 郑州职业技术学院，河南郑州 450121) 摘 要:制备配对胃蛋白酶原 II (PG II )单抗，建立人血清中胃蛋白酶原 E 夹心 ELISA 检测方法。用胃 蛋白酶原 E 免疫 Balb/c .J、鼠，制备免疫脾细胞，与 SP2/0 融合，用 HAT 培养基进行筛选培养，间接 ELISA 检测阳性克隆，对阳性孔进行多次单克隆化，选出效价高、分泌性能稳定的杂交瘤细胞，制备腹水并进行纯 化。进行单抗画己对，建立胃蛋白酶原 E 双抗体夹心检测方法。获得 1D8 , lC6 , 2H lI ， 2E3 等 4 株杂交瘤，经配 对试验，确定 1D8 ， 2Hl1可作为夹心 ELISA 检测 PGn 的单抗。成功制备出画己对羊抗，初步建立了 PGn 双抗 体夹心 ELISA 方法。 关键词:胃蛋白酶~;单克隆抗体;双抗体夹心 ELISA 中图分类号:5854.43 文献标i只码 :A 文章编号:1007-5038(2012)04-0056-04 胃蛋白酶原(pepsinogen. PG)是胃茹膜分泌的 IgG ，由河南省生物工程技术研究中心提供F 胃癌阳 特异性功能酶，人胃蛋白酶原可根据生化和免疫原 性血清，由郑州市肿瘤医院提供;胃蛋白酶原E 检测 试剂盒(酶联免疫法) .购于北京美康生物技术研究 性特征分为 2 种不同的胃蛋白酶原亚群[口。在琼脂 中心;羊抗鼠酶标二抗(HRP-IgGl 、 HRP-IgG2a、 糖凝胶电泳下，胃蛋白酶原的迁移率由快到慢分为 PG1-PG77 种同工酶，其中 PG1-PG5 有共同的 HRP-IgG2b、 HRP-IgG3 , HRP-IgA 及 HRP-IgM) • 免疫原性，合称 PG 1 (又称 PGA) ;PG6-PG7 迁移 购于北京中杉金桥生物技术有限公司。 速度较慢，合称 PGn (又称 PGC). PG 1 是胃体茹 1. 2 方法 1. 2.1 小鼠免疫取8 周龄-10 周龄 Babl/c 雌性 膜主细胞分泌，除主细胞分泌外，幽门腺和十二指肠 也分泌 PG n[2J • 小鼠3 只，将抗原和福氏完全佐剂(CFA) 等体积棍 合，腹腔注射，首次免疫 2 周后二次免疫，用福氏不 胃癌是全球高死亡率的第二大疾病，严重威胁 完全佐剂(IFA) 与抗原等体积棍合。每次 100 着人类的健康。对胃癌的早发现、早治疗可明显延 μg/只。二次免疫后 10 d 左右进行抗体效价检测， 长胃癌患者的生存期。因此，对胃癌高危人群的预 断尾采血、分离血清，采用间接 ELISA 法检测，用琼 测及筛查就显得尤为重要。国内外胃癌标志物的研 扩试验进行复检。采用同种未免疫小鼠血清作为阴 究己广泛开展并取得了一定的进展。当胃妻自膜发生