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第十一章  别构酶及其动力学  一 别构酶及其作用特性 (一) 概述 ： 别构效应是机体代谢的重要方式 代谢调节的方式： 迟缓调节: 需时间长，几个小时。通过改变酶 分子的合成、降解、酶原转化来控 制细胞内酶分子浓度。 快速调节: 时间短几秒或几分钟。对体内现有 的酶进行激活或抑制。 调节酶: 在体内代谢过程中起快速调节作用的酶 包括共价调节酶和别构酶 ATCase的别构效应表现为四级 结构的大幅度变动： 利用ATCase的二底物过渡态类似物：PALA（N-膦乙酰-L-Asp)的研究表明： ATCase的6个亚基的底物结合位都位于催化链之间的 界面上，活性中心相距2.2nm 结合PALA后的酶，催化三聚体彼此拉开1.2nm，同时 旋转10o；并使分别位于催化链N-端与C-端的氨甲酰 磷酸结合位和Asp 结合位彼此靠近，成为高亲和状态 一个催化亚基的构象变化通过亚基界面之间的相互作 用，传递给另一个催化三聚体，并引起后者构象的转变 (2) 负协同效应： 3-P-甘油醛脱氢酶： 3-P-甘油醛 + NAD+ + Pi ? NADH + 1,3-2P-甘油酸 +H + 半位反应性：该酶为四聚体，但4个活性部位中只 有2个起作用 兔肌 3 – P-甘油醛脱氢酶与NAD+结合的解离常数 解离常数 透析平衡法 荧光测定法 K1 10-10M 1×10-8 M K2 10-9 M 9×10-8 M K3 3×10-7 M 4×10-6 M K4 2.6×10-5 M 3.6×10-5 M 二 别构酶的几个动力学概念： (一) S 0.5 ：表观Km值，在别构酶反应中速度达 到最大反应速度一半时的底物浓度 (二) K系统与V系统： 别构效应剂类型： ① K型效应剂： 只改变S 0.5 ，但Vm不变 ② V型效应剂： 不改变S 0.5 ，只改变 Vm ③ K-V型效应剂： S 0.5 和Vm都改变 三 别构动力学 (一) Hill模式: 把研究血红蛋白动力学应用到别构动力学。 E + nS k1 ESn k2 E + P k -1 总的解离常数Ks’= [E][S]n [E0]=[E] + [ESn] [ESn] 饱和分数： Ys = 酶所结合的底物分子数 酶上底物结合位点数 Ys= n [ESn] = [S]n n [E0] Ks′+ [S]n (二) MWC模式： Monod-Wyman-Changeux :于1965年提出，也称齐变模式 1. 模式要点: ① 别构蛋白是一种寡聚体，由多个相同原体构成。原体是寡聚蛋白最小的功能单位，它们在别构蛋白中占有相等的地理位置。寡聚蛋白至少有一个对称轴。 ② 每个亚基对同一种配体只有一个结合位点。 ③ 蛋白亚基可具有R型和T型两种构象。这两种构象在无底物和效应剂存在时处于平衡状态。 ④ 蛋白亚基都只能取相同的构象，无杂合体。亚基齐步转变 ⑤ 亚基的构象可变，但蛋白分子的对称性不变。 ⑥ 无论多少配体结合到酶上，配体与R态 和T态酶的内在解离常数都相等， 分别以KR和K