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草履虫的系列实验 纪星宇（2012302630004） 一、目的与内容 1.学习原生动物的采集、单克隆培养和鉴种 2.探究原生动物的应激性，理解原生动物应激性的原始性 3.观察原生动物的无性生殖过程和规律 4.观察草履虫食物泡的变化，研究食物泡中的PH变化 5.比较原生动物和后生动物组织细胞对刺激反应的异同 6.学习常用试剂的配制和使用 *7.了解原生动物有性生殖的方式和决定因素，研究接合生殖前后大核系的变化 内容：草履虫的采集与鉴种 草履虫横二分裂的观察 草履虫食物泡的观察 草履虫趋性的实质 后生动物激素对原生动物的影响 常用生物学试剂对原生动物的作用 草履虫相对接合型的鉴定 光线对接合生殖的影响 草履虫接合生殖前后接合型的变化 二、材料与用品 新鲜稻草、烧杯、滤纸、酒精灯、玻璃棒、过滤漏斗、玻璃导管、广口瓶、标签纸、台灯、表面皿、微吸管、试管、PH试纸、镜台尺、载玻片、盖玻片、培养皿、离心机、棉球、恒温箱、托盘天平、量筒、温度计、中性红纯乙醇溶液、2%秋水仙素溶液、1%乙醚溶液、0.02%詹纳斯绿B染液、20%丙酮溶液、碳酸氢钠、蒸馏水、0.01%肾上腺素、0.01%胰岛素、碘液 三、操作与观察 （一）草履虫的采集与鉴种 1.配制稻草培养液 取新鲜稻草（注意清洗以除去肥料和农药）10g和碳酸氢钠1g，加入1L 清水于烧杯中煮沸10~15min，直至液体成为清亮的黄褐色。趁热过滤后煮沸10min，在烧杯上蒙上双层洁净纱布，保温在20~30℃，培养3d 直至液面出现灰白色薄膜。通入充足空气备用。 2.采集自然水体中的草履虫 在水流缓慢，有机质丰富的水体中取带有微小白色浮渣的自然水。取池塘、下水道、水田、湖沼各一处，分别采水250ml（注意水样不要混入泥沙渣滓，运输时不要封口）。依次编号为A、B、C、D。水面上20cm处施加垂直光照24h。 3.草履虫的单克隆培养 在表面皿中放适量蒸馏水，在体视显微镜下吸取单个草履虫（可利用其趋电性分离以便操作），分别加入不同的表面皿中。每个水样取九只草履虫。确认吸取的为单个虫体后，再次吸取虫体加入到10ml稻草培养液中，将试管分别依次编号为1、2、3等（如A水样首个虫体培养试管编号为A1，第二个编号为A2）。注意每次操作后立即清洗滴管再继续操作（后同）。将试管保温25℃ 培养7d 直至肉眼可见大量虫体，注意保持培养液的水质，每2d更换一半培养液（从底部吸取一半培养液后添加一半新鲜培养液，注意无菌操作），稳定PH在7.0-7.2。 4.草履虫的鉴种 分别吸取各试管中的草履虫，碘液染色后于显微镜下测量观察，将所得结果填入附表一，并以此判断草履虫的种，把结果填入表中。 （二）草履虫横二分裂的观察 取分裂旺盛的草履虫培养液暗室培养3d。在载玻片上滴一小滴稻草培养液，从草履虫培养液中取单个虫体于其中独立暗室培养（注意保湿）。用体视显微镜每隔0.5h镜检一次，连续观察24h，以观察两次连续的横二裂。注意子代草履虫是否同时进行第二次分裂。 （三）草履虫食物泡的观察 将中性红纯乙醇染液加入不同PH的溶液中，观察其颜色变化。制作草履虫临时装片，滴加一滴中性红纯乙醇染液后盖上盖玻片在高倍镜下连续观察食物泡，每5min记录一次颜色变化，连续观察40min。把实验现象填入附表二。 （四）草履虫趋性的实质（电场，电流还是电化学？定向还是趋向？） （五）后生动物激素对原生动物的影响 分别取等量蒸馏水、0.01%胰岛素、0.01%肾上腺素于三张载玻片上，分别滴加等量草履虫培养液一滴，立即盖上盖玻片，在高倍镜下观察虫体运动和胞质流动情况。将实验结果填入附表五。 （六）常用生物学试剂对原生动物的作用 分别取等量草履虫培养液五滴于五张载玻片上，分别滴加一滴蒸馏水、2%秋水仙素、1%乙醚、0.02%詹纳斯绿B、20%丙酮，立即盖上盖玻片，在高倍镜下观察虫体变化。将实验结果填入附表五。 （七）草履虫相对接合型的鉴定 1.扩大克隆培养 取十二株同种的草履虫的纯系培养液（均不足12株则将最多的种全部使用）转入已加入足量稻草培养液的试管内，塞上棉球并编号，22℃恒温培养7d。 2.富集草履虫 分别取各纯系培养液于对应编号的离心管内，500rpm离心3min，去上清液；加入蒸馏水，重复离心，去上清液。再加入极少量蒸馏水以获得草履虫纯系浓集液。若草履虫在克