ABO疑难定型.doc

ABO疑难定型 一、ABO疑难血型鉴定的方法 　　（一）正反定型：　　正定型：-A, -B，-AB, -H, -A1　　反定型：Ac, Bc, Oc, 自身对照　　1.　ABO正定型中各种试剂用途　　　　疑难定型中正定型用抗血清　　　　抗-A及抗-B　　　　抗-AB:确认弱A和弱B抗原,与弱A及弱 B抗原亲和力强,会产生强反应　　　　抗-H:用于检查亚型及孟买型, A亚型红细胞上的H抗原多于正常A型　　　　抗-A1: 用于A亚型(如A2, A3)检测　　2.　H抗原在红细胞上的分布　　　　　　3.　ABO反定型中各种试剂的用途　　　　反定型中试剂红细胞的意义　　　　A及B细胞: 确认抗-A或抗-B抗体　　　　O型红细胞:检查是否存在ABO系统以外抗体干扰ABO反定型　　　　自身对照: 用于确认正反定型结果的有效性,排除自身抗体对定型的干扰(如冷凝集等)　　　　A2细胞: 用于亚型的鉴定, 尤其是在怀疑是A亚型且又存在抗-A1抗体的情况下 　　（二）型物质测定　　型物质准备：1~2ml唾液，沸水煮10分钟，离心后得到的上清。　　标清的调制：标清用盐水稀释至其效价为1：16　　中和：将0.5ml型物质与调制后的标清0.5ml等体积混合,室温放置30分钟　　检测：用Ac检测中和后的抗-A, Bc检测中和后的抗-B.　　结果判断：如果抗-A被中和，则被检者为A型，如果抗-B被中和，则被检者为B型。 　　（三）吸收放散　　吸收用RBC：盐水洗涤5次的被检者压积RBC 1ml。　　吸收用的标准血清　　将压积RBC和标清按等体积比例混合，在相应的温度条件下（4℃）孵育1小时，每隔15分钟混匀一次　　用盐水洗涤孵育后的细胞6次，得到压积RBC，加入等量盐水。　　56℃水浴震荡10分钟，离心获得上清即为放散液。　　用标准试剂红细胞检测放散液。 　　（四）O型筛选红细胞的应用　　抗原组成:三组合细胞,要求必须具备全部的Rh因子　　I: O型R1R1(CDe/CDe); II:O型 R2R2(cDE/cDE); III: O型rr(cde/cde)　　用途: 用于受血者、献血员及孕产妇等的ABO系统以外不规则抗体的筛选　　目的: 在配血之前,有针对性、按比例的去寻找与带有抗体的病人相配合的血 　　（五）自家冷凝集血样的ABO定型　　正定型用红细胞的准备:　　血样采集后,立即离心,获得压积红细胞　　用37℃温盐水洗涤红细胞　　45℃热放散3分钟　　巯基试剂处理: 破坏IgM抗体　　自家冷凝集血样的ABO定型　　反定型用血浆或血清的准备　　血样采集后放置4℃冰箱静置24小时,使红细胞充分吸收自身冷凝集抗体　　用自身红细胞吸收去除自身冷抗体　　用O型红细胞吸收去除ABO系统以外的非特异性及特异性抗体 　　（六）获得性B　　1.　获得性B及多凝集现象　　　　获得性B: 　　　　肠紊乱及感染病人, 细菌酶影响A抗原的受体　　　　肠内壁通透性增加,而后细菌多糖吸附在红细胞表面　　　　多凝集现象:异常或变形的RBC被所有正常人的血清凝集(微生物酶作用暴露或激活膜隐蔽受体多凝集血样中的血清不与自身反应)　　2.　获得性B产生的主要机理　　　　 二、ABO正反定型不符的问题分析 　　（一）ABO定型问题经常发生的情况为：　　1.　明显缺失应该出现的抗-A或抗-B：　　　　(1) 新生儿血样　　　　(2) 免疫缺陷、免疫紊乱　　　　(3) 前带现象　　　　(4) 血型型物质过多　　　　(5) 抗原太弱，常规方法检查不出来，相应血清中无抗体　　　　(6) 亚型，反应是混合视野　　2.　由于试剂被污染，或试剂中有额外抗体　　3.　明显多出抗原(或多出抗体)　　　　(1) 亚型，如A2型可能血清中有抗-A1　　　　(2) 自家凝集　　　　(3) 获得性B 　　（二）引起ABO正反定型不一致的原因分析　　1.　技术因素：　　　　(1) 试剂贮存不当　　　　(2) 使用技术错误　　　　(3) 使用错误的试剂　　　　(4) 使用污染或失效的试剂　　　　(5) 离心速度不当　　2.　存在IgM性质的自家冷抗体　　　　由于自家冷抗体(冷凝集病,CHD)而导致自家溶血的病人，在低于37℃时血细胞自发凝集，影响正反定型。可用DTT或2-ME来处理细胞及血清来解除此种IgM抗体引起的干扰。血清的反定型可在37℃进行，用O型红细胞作为对照。　　3.　抗原表达弱或缺失：　　　　(1) A、B抗原的表达可在下述情况下被抑制： 　　　　　　a.白血病 　　　　　　b.双胞胎 　　　　　　c.H基因变异 　　　(2) A、B抗原表达太弱：由于A、B抗