上调RI对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞EMT及转移的影响.pdf

2016 年 2 月 基础医学与临床 February 2016 Basìc &Clinical Medicine Vo l. 36 No.2 第 36 卷第2 期 文章编号: 1001-6325(2016)02-0199-08 写F 虫二乞仓Ã 上调 RI 对小鼠黑色素瘤 B16-FI0 细胞 EMT 及转移的影响 周宇箭，潘湘阳2 ，陈俊霞2 * (重庆医科大学 l 基础医学实验教学巾，心; 2. 细胞生物学与遗传学教研室，重庆 4(0016) 摘要:目的研究核糖核酸酶抑制国子基因表达对小鼠黑色素瘤 B16-F10 细胞 EMT 及转移的影响。方法构建 RI 真核表达质粒 pIRES2-EGFP-RI ，稳定转染 BI6-FIO 细胞。 RT-PCR 、 Westem Llot 和免疫荧光检测 RI 的表达;HE 染 色及相差显微镜观察细胞形态;FITC 标i己的鬼笔环肤染色，激光共聚焦观察细胞骨架;站附实验、戈IJ 痕实验和 Tran. swell 法检测细胞教附、迁移和侵袭能力的变化; Western blot 检测 EMT 反转移相关蛋白的表达:分别将各组 B16- FlO细胞眼眶静脉注射到 c57/BL 小鼠，建立肺转移动物模型，注射3 周后处死小鼠c 取肺称重，在解剖镜下汁数肺 转移结节数:肺组织切片 HE 染色观察肿瘤细胞转移;免疫组化检测肺转移瘤组织中转移及 EMT 相关蛋白的表达。 结果 RI 表达上调后，细胞由间质型向上皮型转换，细胞骨架重排; BI6-F10-RI 细胞组站附、迁移和侵袭能力下降; 与对照组相比， BI6-FlO-RI 细胞中 MM陀、MMP9、snail ， slug 、 vimentin 、 twist 和 N-cadberîn 的表达明显降低，而 E-cad. l阳in ， nm23-Hl 蛋白的表达明显增加(P <0. 01 或 P<O. 01) 。实验组与对照组比小鼠肺的转移结节明显减少，同 时 EMT 及转移相关蛋白在瘤组织、中表达与体外细胞一敛。结论 t调核糖核酸酶抑制因子能够显著仰制B16-FIO 细胞 EMT 及侵袭、转移，RI 可望作为治疗黑色素瘤的靶蛋白= 关键词:核糖核酸酶抑制因于;EMT;BI6-FlO细胞;转移 中图分类号:R739.5jR730.23jR394-33 文献标志、码:A Effects of up-regulatÎng RI on EMT and metastasÎs of mouse melanoma B16-FI0 2 2 ZHOU Yu-jian ' , PAN Xìang-yang , CHEN Jun-xìa * (1. Experimental Teaching Center of Basic Medicine ;2. Dept. of Cell Biology and Genelics. Chongqing Medieal University , Chongqing 4αJ016. China) Abstract: Objective To ìnvestigate the effects of rìbonuclease ìnhìbìtor expression on EMT and metastasis of mouse melanoma BI6-F lO cells. Methods RI eukaryotic expre