以竹粉为基质固态培养虫拟蜡菌及其产漆酶条件研究.docVIP

　　以竹粉为基质固态培养虫拟蜡菌及其产漆酶条件研究 摘 要：该研究探讨了不同培养条件对Ceriporiopsis subvermispora NL-4固态发酵产漆酶的影响。结果表明，当培养温度为30℃、培养基的初始含水率为64%、接种量为12%、起始pH 6.0时，该菌株活力最好且漆酶产量高；在条件下培养10d，漆酶活力可达12.45 U/g干基，比优化前提高了40%。 中国 1/vie 　　关键词：虫拟蜡菌；固态发酵；漆酶 　　中图分类号 TQ925 文献标识码 A 1007-7731（2017）08-0018-03 　　Abstract：Effect of culture conditions for the production of laccase by Ceriporiopsis subvermispora NL-4 entation using the milled bamboo as main substrate.The results of single-factor test shoal culture conditions of the temperature，moisture of medium，inoulum volume and the initial pH ispora NL-4 eters，the laccase activity edium，itive conditions. 　　Key ispor；Solid-fermentation；Laccase 　　漆酶（laccase，p-diphenoloxidase，E.C.1.10.3.2）最初是?钠崾髦谢竦玫模?随着生物技术的发展，微生物源漆酶有了较大的发展。由于漆酶在多个领域具有广泛的用途，对漆酶的需求日益增多[1-2]。但目前微生物产漆酶的产量仍不高[3]，培养期过长导致染菌的可能性增大；漆酶的产量过低严重制约了其分离提取和纯化[4]。采用农林生物质资源作为主要基质，通过固态培养的方式探索漆酶的产生及其产量的提高，不但可以有效节约资源，降低生产成本，减少污染物的排放[5]；同时，与液体发酵相比，固态发酵更接近于自然界的生态环境，有利于菌株产酶[6-7]。虫拟蜡菌（Ceriporiopsis subvermispor）[8]是一类高产漆酶的白腐菌，本研究室对其进行了菌株的诱变，获得了一株漆酶产量明显提高的菌株C. subvermispora NL-4[9]。因此，本研究以Ceriporiopsis subvermispora NL-4为发酵菌株，以竹粉为主要基质，对该菌固态发酵产漆酶的条件进行优化，以提高漆酶产量和产酶效率[10]。 　　1 材料与方法 　　1.1 菌株 C. subvermispora NL-4，本研究室诱变选育获得。 　　1.2 竹粉 竹粉，为毛竹（Phyllostachys pubescens）的加工剩余物，产自浙江临安，烘干后过40目筛，干燥贮存备用。 　　1.3 试剂 葡萄糖等均为国产分析纯，购自杭州木木生物科技有限公司；ABTS，购于sigma公司；马铃薯等购于临安浙皖农贸城。 　　1.4 培养基 （1）PDA固体培养基（in[10]。（2）液体种子培养基（in[10]。（3）固态发酵基础培养基：在250mL三角瓶中装竹粉30g，含水率60%，121℃灭菌20min[10]。 　　1.5 固态发酵 参照王超等固态培养方法[10]。 　　1.6 生化参数的测定 （1）粗酶液制备及酶活测定：参照高恩丽等方法并改进[11]。参照黄丹莲等方法并改进[12]。（2）生物量的测定：用氨基葡糖法，参照彭丹方法测定[13]。 　　2 结果与分析 　　2.1 C. subvermispora NL-4生长曲线和产酶曲线 将液体种子以10%接种量接入固体发酵基础培养基中，180r/min、28℃培养16d，漆酶产量和生物量如图1。由图1中菌体的生长曲线显示，在前4d之内，菌体生长较慢，之后在4～8d之内菌体干重增加较快，呈现出对数生长期，8～11d后保持基本稳定[10]。酶活曲线显示，C. subvermispora NL-4在固态发酵条件下，第5d才开始产酶，第12d漆酶活力达到最高，因此初步确定12d为后续发酵条件研究的培养时间。 　　2.2 培养温度对C. subvermispora NL-4固态发酵产漆酶的影响 将固态发酵基础培养基分别在15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃条件下，180r/min、恒温培养12d后测漆酶产量，结果如图2。图2表明，培养温度对C. subvermispora NL-4固态发酵产漆酶的影响较大，30℃时漆酶酶活达到最高，40℃时仅为最高酶活的39%，因此确