同位素稀释―超高效液相色谱―线性离子阱串联质谱分析谷物及其制品中呕吐毒素及其衍生物和代谢物.docVIP

　　同位素稀释―超高效液相色谱―线性离子阱串联质谱分析谷物及其制品中呕吐毒素及其衍生物和代谢物 摘要 建立了谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、去环氧脱氧雪腐镰刀菌烯醇的同位素稀释超高效液相色谱线性离子阱串联质谱（UHPLCQTRAPMS/MS）定性确证和定量测定方法。样品经乙腈水（84KG-3∶KG-516，V/V）混合溶液提取，乙腈饱和的正己烷除脂，HLB固相萃取柱净化，RM）信息依赖性采集（IDA）增强子离子扫描（EPI）模式检测，在线EPI谱库定性分析，同位素内标定量，在1～300μg/L浓度范围内，4种目标物的线性相关系数均大于0.999，检出限为0.1μg/kg，定量限为0.3μg/kg，添加5，50和200μg/kg的3个浓度水平，4种目标物的平均回收率均在81.3%～101.7%之间，相对标准偏差均小于5%，将该技术应用于FAPAS阳性玉米质控样品和5种代表性的样品进行测试，结果表明，本方法简单、准确、快速，适用于谷物及其制品中呕吐毒素及其衍生物和代谢物的快速确证和定量测定。 中国 8/vie 　　关键词同位素稀释；呕吐毒素及其衍生物和代谢物；超高效液相色谱；线性离子阱串联质谱 　　1引言 　　脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON），又称呕吐毒素，其中3乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（3AcDON）、15乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（15AcDON）是其乙酰化衍生物[1＼]，去环氧脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DOM1）是DON在动物或人体内的代谢产物；这类毒素耐热、耐酸碱，化学性质稳定，在加工储运过程中不易被破坏[2＼]。其毒性表现为急性毒性、免疫毒性、细胞毒性、生殖毒性和三致作用等[3～5＼]，主要污染小麦、大麦、玉米、大米等谷物[6，7＼]，间接造成啤酒、酱油、米粉等谷物制品的污染[8＼]，部分谷物制品中含有动物源性成分，例如婴幼儿米粉和中老年谷物制品中会添加牛奶、鸡蛋、鸡肉、牛肉等，因此DOM1也成为该类制品的污染物。食品添加剂联合专家委员会（JECFA）将原来针对DON的暂定每日容许最大摄入量（PTMDI）改为DON及其乙酰化衍生物组的PTMDI为1μg/kgbadzuLC30AD超高效液相色谱仪（日本岛津公司）；MilliQ超纯水器（美国Millipore公司）；高速冷冻离心机（美国Thermo公司）；全自动氮吹浓缩仪（美国Biotage公司）；固相萃取装置、S级，Merk公司）；正己烷（HPLC级，Merk公司）；氨水（HPLC级，Sigma公司）；水为MilliQ系统纯化水；除已注明外，所用试剂均为分析纯。 　　DON（（199.9±2.78）μg/mL，美国Smart公司）；3AcDON（（100.5±0.6）μg/mL）、15AcDON（（100.1±1.4）μg/mL）、DOM1（（50.5±1.3）μg/mL）、13C15脱氧雪腐镰刀菌烯醇（13C15DON，100μg/mL）和13C173乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（13C173AcDON，100μg/mL）均购于Sigma公司。 　　2.2混合标准溶液及内标溶液的配制 　　混合标准溶液配制：分别精密移取50μLDON，100μL3AcDON，100μL15AcDON和200μLDOM1至10mL容量瓶中，以乙腈定容，配制成混合标准储备液（1000μg/L， 　　18℃保存，有效期6个月）；准确移取1.0mL混合标准储备液至10mL容量瓶中，乙腈定容，配制成混合标准工作液（100μg/L）。JP 　　内标溶液配制：分别准确移取100μL13C15DON和13C173AcDON同位素内标储备液至10mL容量瓶中，以乙腈定容，得混合同位素内标溶液（1000μg/L， 　　18℃保存，有效期6个月）。 　　2.3样品前处理 　　2.3.1提取谷物及制品：准确称取2.0g（精确至0.0001g）样品（粉碎的固体样品或脱气后的液体样品），加入适量内标溶液，混匀放置5min，加入15mL乙腈水（84KG-3∶KG-516，V/V）混合提取液，超声提取20min，JP再用乙腈水（84KG-3∶KG-516，V/V）定容至20.0mL，10000r/min离心10min，取10.0mL上清液，待净化。