基于COI序列的哈蟆油基原动物DNA条形码鉴定研究.docVIP

　　基于COI序列的哈蟆油基原动物DNA条形码鉴定研究 [摘要] 哈蟆油具有较高的经济和社会价值，其混伪品较多，给市场造成了很大的混乱。利用基于COI序列的DNA条形码技术对已鉴定的东北林蛙、中国林蛙、桓仁林蛙和黑龙江林蛙进行PCR扩增和测序，建立4种林蛙COI基因数据库；将所测的序列与GenBank上的序列进行比对，显示为上述4种林蛙；应用MEGA（molecular evolutionary geics analysis）7.0软件计算K2P遗传距离并构建NJ（neighbor-joining）系统聚类树，所测4种林蛙的序列和GenBank上下载的4种林蛙的序列分别聚为1支，但与GenBank上下载的2个外群独立分开，东北林蛙的COI基因可能存在地域性差异，但该技术并不能鉴别林蛙的雌雄。结果显示DNA条形码技术能够准确鉴定哈蟆油的基原动物，说明DNA条形码COI为哈蟆油基原动物的鉴定提供一个新的手段和方法。 中国 1/vie 　　[关键词] 哈蟆油；东北林蛙；中国林蛙；DNA条形码；鉴定 　　Identification of Ranae Oviductus original animal based on COI sequences 　　eng-hu，KANG Ting-guo*，XU Liang*，YANG Yan-yun，CAI Zhen-jiao 　　（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China） 　　[Abstract] Ranae Oviductus has a high economic and social value， but its adulterants are more numerous， arket. Using DNA bar code technology based on COI sequence for PCR amplification and sequencing of the identified Rana dybourensiss， the COI gene database of four species of Rana easured sequence olecular evolutionary geics analysis） 7 .0 soft cluster tree. The sequence of the four species of Rana measured GenBank， but separated from the t GenBank. The COI gene of the R. dyboale and female Rana. The results shoal of R. oviductus. It indicates that DNA bar code COI provides a neethod for the identification of R. oviductus. 　　[Keyporaria chensinensis[1]，近年来部分学者认为哈蟆油的基原动物为东北林蛙R. dybowkii[2-7]，我课题组对哈蟆油的基原动物进行考证，认为哈蟆油的基原动物为东北林蛙。《四库全书?盛京通志》记载“山蛤……多伏岩中，似?r?W而大，腹黄红色，俗称哈什蟆……”；《辽海丛书?沈故篇》记载“哈什马形似田鸡，腹有油如粉条，有子如鲜蟹黄，取以作羹，味极肥美，然唯与京一带有之。满洲人用以祭祖，取其??也 　　。”[8]根据上述记载，“盛京”、“兴京”分别指今天的辽宁省沈阳市、辽宁省新宾满族自治县，说明哈蟆油的基原动物分布在辽宁地区，现在辽宁新宾依然是哈蟆油的主产区之一。本实验收集长白山地区的东北林蛙、桓仁林蛙和黑龙江林蛙与内蒙古地区的中国林蛙，并鉴定为上述4种林蛙。提取4种林蛙的总DNA，进行PCR扩增并测序，将所测序列与GenBank上的序列进行比对。本实验首次利用DNA条形码技术鉴定4种林蛙和对不同地域的东北林蛙进行鉴别，结果显示DNA条形码技术能够准确鉴定哈蟆油的基原动物；东北林蛙线粒体COI基因的2个位点呈现地域性的变异，该变异位点是否具有稳定性需要进一步研究。