一轮复习----微生物的培养与应用.ppt

专题2 : 微生物： 结构简单,个体微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能观察到。 一、微生物基础知识： 对于细菌来说，菌落是鉴定菌种的重要依据。 菌落： 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖后形成肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体。 菌落 二 、微生物实验室培养的基础知识： （一）培养基 （1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。 1.培养基的类型和用途 2. 培养基配方： （二）无菌技术 都有水、无机盐、碳源、氮源 固体培养基：菌落 主要用于菌种的培养、分离、纯化、鉴定。 液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 主要用于菌种的培养（富集）。 选择培养基 加入青霉素等抗生素的培养基: 酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 自养型微生物 鉴别培养基： 伊红----美蓝培养基可以鉴定大肠杆菌。 伊红----酸性红色荧光染料 美蓝----碱性蓝色荧光染料。 伊红美蓝染色剂可以和大肠杆菌代谢产生的有机酸结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽。 含有血清、组织提取液（如鸡胚浸液）等。 优点：营养丰富，培养效果好 缺点： （1）来源受限 （2）成分复杂，影响某些实验产物的提取和实验结果的分析。 天然培养基： 根据细胞生长所需物质的种类和数量，人工方法模拟合成。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 。 缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 合成培养基: 血清中含有： ①多种营养物质（蛋白质、无机盐等） 蛋白质：白蛋白、球蛋白、铁蛋白等 金属离子：钙、镁、锌等； ②多种激素； ③促贴附物质，如纤粘蛋白、胶原等。 ④各种生长因子 ⑤不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。 　（1）消毒： 　　利用较为温和的化学或物理方法，杀死大部分微生物的过程。 2.包括：消毒和灭菌 （2）灭菌： 　　用强烈的理、化因素消灭所有微生物，包括所有的繁殖体（孢子）、芽孢及病毒，而达到完全无菌之过程。 （二）无菌技术 1.概念： 微生物培养中，所有防止杂菌污染的方法。 1、煮沸消毒法: 100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：（可用于牛奶微生物的消毒） 70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法: 用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒法： 超净工作台的消毒 常用消毒方法： 1、灼烧灭菌： （接种环、接种针等金属用具） 2、干热灭菌： 160-170 ℃下加热1-2h。 （耐高温、需干燥--玻璃吸管、培养皿、金属用具） 3、高压蒸气灭菌： 100kPa、121 ℃下维持15-30min. （培养基） 灭菌方法： 三、微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌（培养皿、锥形瓶、移液管、 滴管等干热灭菌） 2、配制培养基 3、培养基灭菌 4、将培养基倒平板 5、接种微生物 （平板划线法和稀释涂布法 ） 6、恒温箱中培养：（37。C恒温箱,培养12-24小时） 7、保存菌种 配制培养基： 1.计算：按比例计算各成分的用量 2.称量: 3.溶化:(酒精灯加热，使其在烧杯内溶化，溶化后定容至1000ml) 培养基灭菌: 将溶化好的培养基分装到锥形瓶中（体积在一半以下），塞好棉花，高压蒸气灭菌15～30min。 之后使培养基冷却…… 倒平板技术 倒平板:液体培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。 放入37℃的恒温箱，2d后观察，平板无杂菌污染才可用来接种. 平板划线接种法 稀释涂布接种法