质谱在单克隆抗体方面的应用.pdf

质谱简介 一、质谱的概念 二、质谱的特点  质谱仪是一个用来测量单个分子质量的仪器(Thompson) ．但实际上质 谱仪提供的是分子的质量与电荷比(m/z or m/e) ；  质谱法应用范围广，可用于未知化合物的鉴定、定量分析、分子结构 及化学特性的确定等方面； -12 -15  所需化合物的量非常低：10 g, 或10 mole ；  对样品有破坏性；  分析速度快；  仪器结构复杂，价格昂贵，使用及维修比较困难。 三、质谱的结构 进样系统 离子源 质量分析器 离子检测器 A. 电子电离源EI A. 气体扩散 A 、磁式单聚焦分析器 B. 化学电离源CI A. 电子倍增器 B. 直接进样 B 、磁式双聚焦分析器 C. 快原子轰击源FAB B. 闪烁计数器 C. 气相色谱 C、四极杆分析器 D. 电喷雾源ESI E. 大气压化学电离源APCI D 、离子阱分析器 F. 场致电离源FI E 、飞行时间分析器 G. 基质辅助激光解吸电离源 F 、傅立叶变换回旋共振分析器 MALDI 四、质谱联用技术 色谱-质谱联用：质谱仪是一种很好的定性鉴定用仪器，对混合 物的分离无能为力。色谱仪是一种很好的分离用仪器，但定性能力 很差，二者结合起来，则能发挥各自专长，使分离和鉴定同时进行 （色谱-质谱联用）。 质谱-质谱联用：为了增加未知物分析的结构信息，增加分析的 选择性，采用串联质谱法 （质谱-质谱联用），也是目前质谱仪发 展的一个方向。 1 、色谱-质谱联用 A 、气相色谱－质谱 （GC-MS ）：应用十分广泛，从环境污染分析、食品 香料分析鉴定到医疗检验分析、药物代谢研究等。而且GC-MS联用是国际奥 委会进行兴奋剂药检的有力工具之一。 B 、液相色谱－质谱 （LC-MS ）：适用于热稳定性差、不易汽化的样品。 C、毛细管电泳－质谱 （CE-MS ）：CE-MS是色质联用中新的发展方向， 其中应用最成熟的是CZE*-MS 。 2 、质谱-质谱联用  两个或更多的质谱连接在一起，成为串联质谱。最简单的串联质谱（ MS/MS ）由两个质谱串联而成，其中第一个质量分析器将离子预分离或 加能量修饰，由第二个质量分析器分析结果。  常见的形式有串联（多联）四级杆质谱、四级杆离子阱质谱、四级杆和磁 质谱混合式串联质谱和采用多个扇形磁铁的串联磁质谱。  特别适合于复杂组分体系且干扰严重的样品中低含量组分分析测定，具有 比GC-MC和LC-MS等一级质谱更高的选择性和灵敏度。 质谱与蛋白质 对于蛋白质的“鉴定”，较早期的方法是利用Edman sequencing，或是二维 凝胶电泳技术。但利用这些技术花费的时间较长； 但从前质谱仅运用于小分子，因为在进行质谱分析时，必须将分子气化及带 上电荷，对于较小的分子而言，并不是相当困难，然而对于大的生物分子（如 蛋白质分子），要将分子气化及带电，同时不能伤害分子的完整性，非常不容 易。 1960~1980年，科学家发展出许多方式，尝试将生物大分子从液相游离化成为 气相分子，例如比较早期的化学游离法、或