第二章料液预处理与细胞破碎.pptVIP

第一节 料液预处理 生物分离过程的一般流程 预处理（Pretreatment ） 采用凝聚和絮凝等各种方法来加速固相、液相分离，提高过滤或离心速度。 为何要对料液进行预处理？ 料液的基本特性 料液的成分很复杂，目标物质浓度较低，大多为1-10%； 悬浮物颗粒小，细胞的相对密度与培养液相似； 可压缩性； 液相粘度大，大多为非牛顿型流体； 悬浮状态稳定：双电层、水化膜、布朗运动。 预处理目的 促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离的效率。 改变原料液的物理性质，包括增大悬浮液中固体粒子的尺寸，降低液体黏度； 将产物转入便于后处理的相中（多数为液相）； 除去部分杂质。 预处理方法 1、加热法 将原料液加热到目标产物稳定的温度范围内。能够降低黏度、促凝聚、部分杂蛋白变性沉淀； 预处理方法 2、调pH值 pH值直接影响发酵液中某些物质（细胞碎片、蛋白质等）的电离度和电荷性质，适当调节pH值可改善料液的特性； 该方法简单有效、成本低廉，恰当的pH值能够促进聚集作用,一般用草酸或无机酸来调节。 预处理方法 3、凝聚 在凝聚剂作用下, 胶体去稳定，并聚集成1mm大小的凝聚块的过程。 预处理方法 4、絮凝 使用絮凝剂将胶体颗粒交连成网，形成10 mm大小的絮凝团过程。 机理：架桥作用。 絮凝剂 絮凝剂是一种能溶于水的高分子聚合物，其相对分子质量可高达数万至一千万以上，长链状结构，其链节上含有许多活性官能团，包括离子基团以及非离子型基团。 它们通过静电引力、范德华引力或氢键的作用，强烈地吸附在胶粒的表面。 当一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同的胶粒表面上，产生架桥联结时，就形成较大絮团，产生絮凝作用。 预处理方法 常用絮凝剂： A、人工合成有机高分子聚合物，如聚丙烯酰胺 ；聚乙烯亚胺衍生物等； B、天然有机高分子聚合物，如淀粉类，纤维素和聚多糖等； C、无机高分子聚合物，如聚合铝和聚合铁等。 预处理方法 5、添加惰性助滤剂 一种颗粒均匀、质地坚硬的多孔微粒。 在发酵液中加入固体助滤剂，则菌体可吸附于助滤剂微粒上，助滤剂就作为胶体粒子的载体，均匀地分布于滤饼层中，降低了滤饼的可压缩性，减小了过滤阻力。 使用方法：A、预涂层；B、按一定比率混合。 助滤剂种类：硅藻土、珍珠岩粉、石棉粉、纤维素等。 第二节 细胞破碎（Cell disruption） 生物分离过程的一般流程 细胞破碎 胞内生物产物在固液分离后，需对收集到的菌体或细胞进行细胞破碎（Cell disruption)，使目标产物释放到液相中。除去细胞碎片后，再进行后续分离纯化操作。 细胞破碎是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内物质（包括目标产物）释放出来的技术。 常见的胞内产品 不同微生物细胞壁比较 细胞的结构 不同种类的细胞结构差别很大，破碎的难易程度也不同，由难到易的大致排列顺序为：植物细胞＞真菌（如酵母菌）＞革兰氏阳性细菌＞革兰氏阴性细菌＞动物细胞。 破碎细胞的目的就是使细胞壁和细胞膜受到不同程度的破坏或破碎，释放其中的目标产物。 细胞破碎法 细胞破碎原理 机械法破碎 细胞在机械作用力下受到压缩和剪切而破碎。细胞越小，所需压缩或剪切力越大，越难破碎。 非机械法破碎 利用化学试剂、生化试剂（酶）或物理性质改变细胞壁或细胞膜结构，增大胞内物质的溶出速率；或者完全溶解细胞壁，形成原生质体后，在渗透压作用下使细胞膜破裂而释放胞内物质。 破碎效率的评价 破碎率：被破碎细胞的数量占原始细胞数量的百分数。 高压匀浆（High-pressure homogenization） 高压匀浆 高压匀浆器的种类 高压匀浆器的种类较多： WAB公司的AVP Gaulin 31MR型 Bran and luebbe 公司SHL40型 意大利Niro Soavi 高压匀浆 破碎动力学方程： 高压匀浆的特点 适用于酵母和大多数细菌细胞的破碎； 不宜用于团状或丝状真菌及较小的革兰氏阳性菌的破碎； 质地坚硬的亚细胞器（如包涵体），易损伤阀座，不适宜该法处理； 由于操作中温度会升高，需对料液作冷却处理，保护目的产物活性。 高速珠磨法（High-speed bead mill） 破碎原理：在高速搅拌作用下，细胞和研磨剂（通常是d1mm的玻璃珠、石英砂、氧化铝等）相互剪切、碰撞而促使细胞壁破碎，释放出内含物。 瑞士的WAB公司和德国西门子机械公司均制造各种型号的珠磨机。如WAB公司的Dyno mill KD45C 高速珠磨法 Netzsch LM-20型珠磨机 高速珠磨法 破碎作用符合一级反应动力学，破碎程度常用细胞破碎率（％）或单位细胞释放出的内含物（mg/g）来表示。现采用破碎率表示，其动力学方程为： 高速珠磨的特点 适用范围较广；珠磨机可用于酵母和细菌，但