RNA提取中各种试剂的作用.docVIP

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2017-05-20 发布于北京
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RNA提取中各种试剂的作用.doc

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氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取RNA时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。提取过程有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和脱离，进入水相。氯仿的作用有多个方面，离心后混合物分成三层：下层苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为。【标准：Trizol加水样层的容量大约为所加Trizol 容量的60% 】 Trizol法提RNA，加氯仿就是要剧烈才行，这样才能彻底地两相混匀。异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，与前面的氯仿不矛盾。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA， RNA沉淀在离心前通常不可见，形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。只不过用量少一点，0.6V~1V就够了，在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。不过感觉效果不如乙醇，偶尔会有沉淀不出来东西的时候醇沉淀是很经常用的方法，因为RNA和某些杂质不溶于异丙醇，所以可以用来沉淀。乙醇沉淀的主要目的是沉淀+除盐。