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实验一 光谱技术 紫外分光光度法测定血清蛋白质
实验二 光谱技术 紫外分光光度法测定血清蛋白质 实验原理 蛋白质分子中存在着含有共轭双键的酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸,使蛋白质在270~~290nm波长范围内具有吸收紫外光的性质，其蛋白质溶液的吸收值与其浓度成正比，以此可作定量分析测定。 实验方法 用标准曲线法 将一糸列浓度不同的标准溶液按照一定操作过程显色后，分别测吸光度，以吸光度为纵坐标，标准溶液（蛋白质溶液）浓度为横坐标绘制出280nm处血清蛋白质的标准曲线，再以相同条件下处理待测样品并测定其吸光度，从而可以从标准曲线上查出相对应的待测液溶度。 实验试剂和器材 试剂：0。15mol/L Nacl溶液 蛋白质标准溶液 蛋白质待测溶液 器材：紫外分光光度计 石英比色杯 试管架 试管 吸管 吸耳球 记号笔 标准曲线纸 实验记录本 4、实验步骤 取9支试管，分别用记号笔标上1—8和U（待测）数字； 按下表格加入试剂 3）、混匀，选用2cm的石英比色杯，在280nm处以第一管调节零点，记录比色结果； 4）、制作标准曲线 以光密度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制出280nm处的血清蛋白质标准曲线； 5）、据标准曲线查出所测蛋白质浓度。 实验总结（包括注意事项） 分三点：化学因素 光学因素 主观因素 1）化学因素 化学因素是指被测溶液不遵守 光吸收定律所引起的误差。主要有： 被测物浓度的影响；溶液PH的影响；杂质的影响；放置时间的影响； 此外，还有溶剂，温度，以及溶液体糸的均匀性等都会引起测定的误差。 2）光学因素 光学因素主要是由分析仪器的性能低劣所引起的误差，仪器性能的好坏直接影响到测定结果的可靠性和精密性。 3）主观因素 由于操作不当所致。如加入试剂的量的准确，加入顺序，试剂的浓度，反应温度和反应时间等因素都对一些有色物质的生成以及颜色的深浅有影响。 * * 光密度值（记录） ？ 1.00 0.750 0.625 0.500 0.375 0.250 0.125 — 蛋白质浓度 2.0 — 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 0.15mol/LNacl溶液 2.0(待测Pro) 4.0 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 — 蛋白质标准溶液（1mg/ml） U 8 7 6 5 4 3 2 1 管号 试剂
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