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第九章 细胞骨架(Cytoskeleton) 细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网络结构。发现较晚，主要是因为一般电镜制样采用低温（0-4℃）固定，而细胞骨架会在低温下解聚。直到 20世纪60 年代后，采用戊二醛常温固定，才逐渐认识到细胞骨架的客观存在。 细胞骨架不仅在维持细胞形态，承受外力、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用，而且还参与许多重要的生命活动如： 在细胞分裂中细胞骨架牵引染色体分离； 在细胞物质运输中，各类小泡和细胞器可沿着细胞骨架定向转运； 在肌肉细胞中，细胞骨架和它的结合蛋白组成动力系统； 在白细胞的迁移、精子的游动、神经细胞轴突和树突的伸展等方面都与细胞骨架有关。 另外，在植物细胞中细胞骨架指导细胞壁的合成。 微丝、微管和中间纤维位于细胞质中，又称胞质骨架，它们均由单体蛋白以较弱的非共价键结合在一起，构成纤维型多聚体，很容易进行组装和去组装，这正是实现其功能所必需的特点。 狭义的细胞骨架指细胞质骨架，包括微丝、微管、中间纤维； 广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。形成贯穿于细胞核、细胞质、细胞外的一体化网络结构。 细胞骨架的特点：弥散性、整体性、可变性 细胞骨架的研究方法 主要有三种： 1、荧光显微镜应用：荧光显微镜研究细胞骨架的动力学 。另外，可用荧光抗体研究以很低浓度存在的蛋白质在细胞内的定位。eg:GFP(绿色荧光蛋白，Green-Fluorescent Protein ）的应用 3、电子显微镜技术的应用： 细胞骨架的一个很特别的特性是用非离子去垢剂，如TritonX-100处理时保持非溶解状态。当用这类去垢剂处理细胞时，可溶性的物质、膜成分被抽提出来，留下细胞骨架，并且同活细胞中的结构完全一样。根据这一特性，采用金属复型技术在电子显微镜下观察到细胞骨架的基本排列。 第一节 微丝与细胞运动 又称肌动蛋白纤维(actin filament), 是指真核细胞中由肌动蛋白(actin)组成、直径为7nm的骨架纤维。是由两条线性排列的肌动蛋白链形成的螺旋 ，形状如双线捻成的绳子。●成分●装配●微丝(microfilament, MF)结合蛋白●微丝特异性药物●微丝功能●肌肉收缩(muscle contraction) 一、微丝的组成与组装（一）微丝的结构成份 1. 肌动蛋白(actin，Mr=43KD)  是微丝的主要结构成分,有聚合成长纤维的能力，在聚合前（单体）分子形状外观呈哑铃状（球形）, 这种肌动蛋白（actin）又叫球形肌动蛋白（G-肌动蛋白，G-actin），在聚合后（多聚体）则呈纤维形，称为纤维形肌动蛋白（F-肌动蛋白，F-actin）。 ● 肌动蛋白的分子组成 肌动蛋白是一种中等大小的蛋白质, 由375个氨基酸残基组成, 并且是由一个大的、高度保守的基因编码。单体肌动蛋白分子的分子量为43kDa, 其上有三个结合位点：一个是ATP结合位点, 另两个都是与肌动蛋白结合的结合蛋白结合位点。 ● 肌动蛋白的分布 肌动蛋白是真核细胞中最丰富的蛋白质。在肌细胞中, 肌动蛋白占总蛋白的10%, 即使在非肌细胞中, 肌动蛋白也占细胞总蛋白的1～5%。肌动蛋白在非肌细胞的胞质溶胶中的浓度为0.5mM。在特殊的结构如微绒毛(microvilli)中, 局部肌动蛋白的浓度要比典型细胞中的浓度高10倍。 ● 肌动蛋白的编码基因 某些单细胞生物, 如酵母、阿米巴虫等只有一个肌动蛋白基因, 而一些多细胞的生物含有多个肌动蛋白基因。如人就有6个肌动蛋白基因, 每一个编码一种肌动蛋白异构体。某些植物含有多达60个肌动蛋白基因。肌动蛋白是非常保守的, 可与组蛋白相比。 （二）微丝的装配及动力学特性 在适宜的温度，存在ATP、K 、Mg 离子的条件下，肌动蛋白单体可自组装为纤维。 ATP-actin（结合 ATP 的肌动蛋白)对微丝纤维末端的亲和力高，ADP-actin 对纤维末端的亲和力低，容易脱落。当溶液中 ATP-actin 浓度高时，微丝快速生长，在微丝纤维的两端形成 ATP-actin“帽子”，这样的微丝有较高的稳定性。伴随着 ATP水解，微丝结合的 ATP 就变成了 ADP，当 ADP-actin 暴露出来后，微丝就开始去组装而变短。 2.体外装配实验 肌动蛋白可在体外装配成微丝，其结构与在细胞中分离的微丝相同。 （三）影响微丝组装的特异性药物 2. 鬼笔环肽(philloidin)： 是一种由毒蕈产生的双环杆肽，与微丝有强亲和作用，与微丝能够特异性的结合，与微丝侧面结合使肌动蛋白纤维稳定，防止MF解聚。且只与F肌动蛋白