水通道蛋白0，1在STZ-糖性白内障发病机制中的研究.docVIP

水通道蛋白0，1在STZ-糖性白内障发病机制中的研究 作者：林雯， 谢茂松， 徐国兴， 何青， 郑卫东 【摘要】 目的 研究水通道蛋白0，1(AQP0、AQP1)在链脲佐菌素(STZ)-糖尿病性白内障发病机制中的作用。 方法 将40只SD大鼠随机分为对照组与糖尿病性白内障组2组，用STZ腹腔注射诱发糖尿病性白内障，每周观察晶状体的变化。分别于实验开始后2，8周末摘取眼球，采用免疫组织化学染色技术检测AQP0及AQP1在晶状体中的表达，各检测10只大鼠20眼。 结果 对照组晶状体保持透明，糖尿病性白内障晶状体在2周末出现空泡，8周末完全混浊。AQP0及AQP1在对照组中阳性表达，糖尿病性白内障组2周表达较对照组强，组间差别具有统计学意义(AQP0：t2周末=3.598，P=0.001;AQP1：t2周末=3.103，P=0.004);糖尿病性白内障组8周表达较对照组弱，组间差别具有统计学意义(AQP0：t8周末=6.994，P0.001;AQP1：t8周末=4.475，P0.001)。 结论 AQP0及AQP1表达异常与糖尿病性白内障的发生、 发展 有关。 【关键词】 水孔蛋白类;链脲菌素;免疫组织化学;白内障;糖尿病并发症 糖尿病性白内障是严重的致盲性眼病，进展较快，常常双眼同时发病。水通道蛋白(aquaporin, AQP)在眼部广泛分布，有效的水转运对维持眼的正常功能是必需的。晶状体细胞表达的AQP维持晶状体的脱水状态、透明性。本实验通过免疫组织化学技术检测AQP0及AQP1在糖尿病性白内障的表达及分布，探讨其在链脲佐菌素(STZ)-糖尿病性白内障发病机制中的作用。 　　 1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 动物 SD大鼠40只，雌雄不限，体质量(150±5)g，购自福建医科大学实验动物中心[动物合格证号：SCXKC(闽)2004 0009]。随机分为2组：对照组与糖尿病性白内障组。 　　1.1.2 主要试剂与仪器 STZ(美国Sigma公司);兔抗鼠AQP0，兔抗鼠AQP1单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，SP试剂盒(北京中杉公司)。Olympus显微镜(BH-2型，日本Olympus公司);微量快速血糖仪器(ONE TOUCH II型，美国强生医疗器材公司);HPLAS～1000高清晰彩色图像细胞测量系统(武汉同济千屏影像公司)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 制作动物模型 大鼠禁食12 h，对照组一次性腹腔注射柠檬酸缓冲液(0.1 mol/L，pH 4.5);糖尿病性白内障组一次性腹腔注射2%STZ溶液(临用时以0.1 mol/L、pH 4.5的柠檬酸缓冲液配置)，剂量为70 mg/kg。3 d后于大鼠尾静脉采血测血糖浓度，排除血糖16.7 mmol/L的大鼠。 　　1.2.2 观测指标及方法 注射后，每周裂隙灯下观察晶状体变化1次，每2周监测血糖1次。在实验开始后2周末及8周末，对照组和糖尿病性白内障组各取动物10只(20只眼)，常规摘取眼球。将取出的眼球立即分别用10%中性福尔马林液固定，石腊包埋切片(0.3 μm)，行免疫组织化学SP二步法检测晶状体中AQP0及AQP1的表达，以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。 　　1.2.3 结果判断 AQP0及AQP1抗原以细胞膜和细胞质出现棕黄色颗粒为阳性反应。采用HPLAS-2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统对AQP0及AQP1的表达进行定量分析，每个标本随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400)，测定每个视野下阳性反应的平均光密度，以5个视野的平均光密度的平均值作为测量值。 　　1.3 统计学处理 数据以x±s表示，采用SPSS 12.0软件包进行统计处理，组间比较采用成组t检验，以P0.05表示差别有统计学意义。 　 　2 结 果 　　2.1 裂隙灯观察 实验过程中对照组大鼠晶状体全部透明;糖尿病性白内障组约于第2周末在晶状体周边部见到空泡，第4周末见到絮状混浊，第8周末完全混浊。 　　2.2 AQP0及AQP1在晶状体中的表达 对照组晶状体纤维可见AQP0棕黄色阳性表达;糖尿病性白内障组2周中晶状体纤维AQP0表达较对照组强;糖尿病性白内障组8周中晶状体纤维AQP0表达较对照组弱，组间差别均有统计学意义(AQP0：t2周末=3.598，P=0.001;t8周末=6.994，P0.001;图1～2)。晶状体上皮细胞中可见到AQP1棕黄色阳性表达;糖尿病性白内障组2周中晶状体上皮细胞AQP1表达较对照组强;糖尿病性白内障组8周中晶状体上皮细胞AQP1表达较对照组弱，组间差别均有统计学意义(AQP1：t2周末=3.103，P=0.004;t8周末=4.475，P0.001;图1～2)。 　　免疫组织化学SP法