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槐角多糖含量测定方法的研究 【关键词】 紫外分光光度法 槐角多糖 提取 含量测定 多糖类化合物是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性。某些多糖不但具有抗癌、抗炎、抗病毒、抗衰老等作用，还是理想的免疫增强剂。 目前 对多糖的 研究 不断深入，而且不断有新的多糖被发现，但从槐角中提取多糖还未见有 文献 报道。我们从槐角中提取出多糖，并测定了槐角多糖的含量。 1 材料与 方法 1.1 仪器与试剂 UV-265WF紫外-可见分光光度计（日本岛津）;722型分光光度计（上海第三 分析 仪器厂）。苯酚试剂:苯酚200g加铝片0.2g和碳酸氢钠O.l g，蒸馏收集180～182馏分。称取30g加蒸馏水溶解，定容于500ml容量瓶中，放入棕色瓶中，冰箱中保存备用。其他试剂均为分析纯。样品槐角于石家庄市冬季采摘，常水清洗，去除杂质，80干燥去除水分，通风阴凉处保存。经鉴定符合 中国 药典2000年版槐角项下规定。 1.2 方法 1.2.1 标准曲线的制备 取干燥的葡萄糖标准品100mg，加水溶解并定容至于100ml。精密量取标准液10μl、20μl、40μl、60μl、80μl、100μl，分别置具塞试管中，加蒸馏水稀释至2.0m1，摇匀，加6%苯酚溶液1ml，迅速加浓硫酸5ml，室温放置40min，以2.0ml蒸馏水，1ml苯酚液，5ml浓硫酸混合液按上述操作做空白，用紫外-可见分光光度法，在490nm波长处测定吸收度（A），对测得数据进行线性回归，回归方程为:A=0.7016C+0.0137，相关系数r=0.9998。 1.2.2 换算因素的测定 精密称取60干燥至恒重的槐角多糖精制品35mg（方法见槐果多糖制备方法的研究），置100ml容量瓶中，加入少量蒸馏水溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.1ml，照标准曲线制备项下的方法测定吸收度。从回归方程中求出多糖供试液中葡萄糖的浓度。按下式 计算 换算因素:f=W.（C×D）。式中W为多糖重量，C为多糖稀释液中葡萄糖的浓度，D为多糖的稀释因素;测得f=2.222。 　　 1.2.3 供试液的制备 取80干燥1h的槐角粉沫5g，精密称定，置索氏提取器中，加入10倍量95%乙醇提取3次，除去黄酮等醇溶性杂质，每次2h，药渣置通风处 自然 晾干后置烧瓶中，加水50ml，水浴（90～100）提连续提取3次，每次2h，提取液合并，高速离心后过滤，滤液逆向流水透析，除 去小分量物质及色素，透析内液定容至500ml，得供试液。 　　1.2.4 稳定性实验 取样品溶液按标准曲线制备项下的方法测定吸光度，每隔l h测定一次，结果表明5h内稳定性良好。 1.2.5 回收率测定 精密称取槐角粉末0.15g，加入槐角多糖7.0mg，再于索氏提取器中用95%乙醇回流2h，残渣溶剂挥去后，连续用水回流2h，反复洗至250m1容量瓶中定容。摇匀后，精确移取l ml，按绘制标准曲线方法测其吸光度值，按样品测定方法进行测定。计算多糖含量、平均回收率为103.9%，RSD=2.61%（n=3）。 1.2.6 含量测定 精密量取供试品液0.1ml，加水1.9m1，按标准曲项下 方法 操作，测定吸收值，从回归方程中求出供试液中葡萄糖的含量。按下式 计算 样品中多糖含量。 多糖含量（%）=C.D.f×100W，其中C为供试液中葡萄糖的浓度（ug.ml），D为供试液的稀释因素，f为换算因素，W为供试样品重量（ug）。测得多糖平均含量为50.4%。 　　2 讨论 2.1 多糖在强酸作用下水解生成单糖，并迅速脱水生成糠醛，糠醛与酚性物质如苯酚缩合成有色化合物，反应迅速，完全，有色物质稳定，并且有色物生成量与多糖浓度存在定量关系，这样用分光光度法在适当波长处可以得到多糖含量。本法简便快速，易行。 2.2 多糖广泛存在于 自然 界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性 ［1，2］ ，是理想的免疫增强剂。它能促进T细胞、B细胞、NK细胞、Mφ细胞等免疫细胞的功能，还能促进白介素、干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子的产生。同时槐角中还含有大量的黄酮类化合物。 目前 对多糖和黄酮的 研究 方兴未艾，多糖和黄酮的作用机理以及生物功能与结构的关系的研究不断深入，而且不断有新的多糖类物质被发现。我们仅测定了槐角中多糖的含量，槐角多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究。 【 参考 文献 】 1 雷晓凌，赵树进，范秀萍，等.弯斑蛸多糖对小鼠免疫活性的 影响 .中药材.2007，30（2）:188-192. 2 李建军，雷林生，余传林，等.灵芝多糖抗肿瘤作用的免疫学相关性研究.中药材.2007，30（1）:71-73. 1