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春化介导的后生内含子长沉默非编码RNA摘要：春化是一种对环境引起的后生开关在冬季寒冷而触发后生沉默花阻遏能力，从而提供了在春天的花朵。在拟南芥中，在冬季寒冷引发的染色质的三甲基化组蛋白H3 Lys27富集花卉抑制，开花位点C（联合体），结果在后来稳定抑制了开花位点C(联合体)。这后生变化是介导的一种进化上保守的抑制复合物，多发卡的抑制复合物（PRC2）。在这里，我们表明，一个长期内含非编码RNA[称为冷辅助内含非编码RNA（COLDAIR）]是为所需春化介导的抑制FLC的后生。 COLDAIR自己也影响了PRC2和目标的组成部分PRC2对开花位点C的作用。我们的研究结果表明，COLDAIR需要通过与PRC2建立互动联合体稳定在抑制染色质。正文：细胞发育命运的决心由先天和遗传程序与环境的相互作用。一重大环境意义的线索，植物监测季节变化是冬季寒冷，为例证通过春化（1）。春化是过程中，其中某些植物获取能力在春天开花迅速通过感应延长暴露在寒冷的冬天（1）。在拟南芥中，对春化状态结果的稳定性，从花了一个强有力的阻遏稳定的镇压，FLOWERINGLOCUS?（联合体）（2）。Aprolonged暴露在寒冷诱导植物homeo域（博士）指含蛋白质，春化钝感3（VIN3）（3），VIN3成为与一个进化保守的镇压复杂，多梳镇压配合物2（PRC2）（4，5）。 PRC2介导三甲基化组蛋白H3 Lys27（H3K27me3）通过其核心组成部分，一组蛋白甲基转移酶，增强的Zeste[电子（z）的]（2，6）。在春化后，PRC2入住开花位点C的增加和增加相关开花位点C的H3K27me3水平染色质，这是所需的维护稳定FLC的镇压（2，5，7，8）。在拟南芥中，有三个同源的E（z）的。这些措施包括叶片卷曲（CLF）的，扫平（SWN）和美狄亚，这参与了一些发展方案拟南芥（6）。然而，分子的决定因素为增加招聘的PRC2随后建立和H3K27me3-在开花位点C镇压染色质丰富春化不长的内含子known.We确定了，非编码转录本次中的作用春化介导的表观遗传沉默联合体通过PRC2招募联合体轨迹。几个长的非编码RNA（ncRNA方法）有被证明为目标镇压组蛋白修饰沉默转录活动和epigenetically 通过与特定的染色质分子间相互作用域（9，10）。值得注意的是，PRC2介导沉默包括interactionwith等非编码RNA （11，12）。一组相关的非编码RNA的反义（称为COOLAIR）由开花位点C已提出能参与春化介导 FLC的镇压（13）。然而，其重要性在春化过程COOLAIR尚未独立假设是demonstrated.We那么长ncRNA方法可能在春化作用，介导的镇压开花位点C，和我们确定从刚开花位点C候选人是明显的非编码RNA 从COOLAIR，而我们已指定内含非编码辅助冷核糖核酸（COLDAIR）（图1A和图S1A）。我们发现使用“平铺”反转录COLDAIR 聚合酶链反应（RT - PCR）检测方法withmore寡核苷酸对100余引物，以覆盖整个基因组区域联合体在春化过程（图1A）。从这平铺的RT - PCR方法，我们观察到连续的RT - PCR技术从第一批产品 FLC的内含子的过程中出现的瞬时冷暴露（图1，A和B）。不像COOLAIR，COLDAIR在感觉方向相联合体mRNA转录（图1A和图S1B）。 COLDAIR 包含一个5帽子结构（图S1C），但我们也没有观察到在一个COLDAIR显着水平多聚腺苷酸[聚（a）条]的RNA丰富的分数（fig.S1D），这表明COLDAIR不太可能要polyadenylated。因此，3末端COLDAIR确定了一个平铺5迅速末端的cDNA扩增的RT - PCR方法（图S1F）。该COLDAIR的大小约为 1100碱基（图中一，甲，F和G）。提高水平的COLDAIR观察只有在与冷暴露在20天表达最高的寒冷， COLDAIR水平恢复到prevernalized水平后超过30天的冷（图1B和图中二）。这种COLDAIR瞬态感应冷暴露过程中所观察到类似为COOLAIR（13），但是，诱导COOLAIR达到高峰，10天的冷暴露，早于COLDAIR峰（图1b）。删除春化反应元件（抗万古霉素肠球菌）在损害FLC的第一个内含子春化介导的刚果解放阵线没有镇压损害联合体花卉阻遏作用（14）。在转录起始位点COLDAIR VRE的区域内（图1A）。为了测试是否 5theVRE地区（不包括theCOLDAIR转录区）足以调解coldinducible转录，我们产生的转基因其中荧光素酶是由109个驱动基线对VRE的5区域对（bp）的（图1C）。我们20强后观察荧光素酶表达冷处理多个转基因株系天（图1，C和D），证实了一种存在神秘的启动子在抗万古霉