结直肠癌免疫细胞浸润与趋化因子单核细胞趋化蛋白1表达的关系.docVIP

结直肠癌免疫细胞浸润与趋化因子单核细胞趋化蛋白1表达的关系 作者：杨春康， 陈道达， 应敏刚 【摘要】 　　目的 研究趋化因子单核细胞趋化蛋白(MCP)1在结直肠癌中的表达及其与免疫细胞浸润和肿瘤浸润转移的生物学行为的关系。 方法 通过免疫组织化学方法检测40例结直肠癌标本中MCP1蛋白的表达以及肿瘤组织中免疫细胞的浸润情况，并分析两者之间的关系。 结果 结直肠癌组织MCP1阳性表达率为96％（36/40）；浸润的免疫细胞以CD68+的巨噬细胞为最多，其次是CD3+、CD8+和CD4+T细胞；MCP1的表达率与肿瘤的转移和Dukes分期呈负相关，与免疫细胞的浸润呈正相关。 结论 MCP1在结直肠癌中的表达可以影响肿瘤浸润转移，亦可聚集免疫细胞至肿瘤局部组织发挥其免疫效应。 【关键词】 结直肠肿瘤； 趋化因子类； 免疫, 细胞； 肿瘤侵润 　　人们早已认识到肿瘤组织中存在免疫细胞的浸润[1]，但它们在肿瘤中聚积的机理及其分子基础目前仍不十分清楚。趋化因子因其能选择性地引导白细胞亚群的定向游走和组织内聚集而倍受关注。本课题组已证实结直肠癌细胞能表达并产生趋化因子[23]，本研究拟探讨趋化因子单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractant protEin1,MCP1）与浸润的免疫细胞之间的关系，以期进一步揭示趋化因子的生物学作用及其临床应用价值。 　 　1 对象和方法 　　1.1 对象 40例标本均来自福建医科大学附属第一 医院 ，男性27例，女性13例；年龄（56±12）岁（35～70岁）；直肠癌24例，结肠癌16例，其中有淋巴结或远处转移者22例。高分化腺癌19例，中分化腺癌14例，低分化腺癌7例。DukesA期5例，DukesB期14例，DukesC期15例，DukesD期6例。 　　术中取新鲜结直肠癌组织，置-80 液氮中保存，40例新鲜保存标本冰冻切片检测MCP1后剩余标本用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋待行免疫细胞检测。收集同一患者距肿瘤边缘＞15 cm相应的正常结直肠组织为对照组。 　　1.2 方法 　　1.2.1 主要试剂 抗MCP1抗体（美国Santa Cruz公司）；免疫细胞抗体（福州迈新生物试剂公司）包括：抗CD3单抗（识别总T细胞）；抗CD4单抗（识别辅助性T细胞）；抗CD8单抗（识别细胞毒性T细胞）；抗CD20单抗（识别B细胞）；抗CD57单抗（识别NK细胞）；抗CD68单抗（识别巨噬细胞）。 　　1.2.2 免疫组织化学检测 将新鲜保存的40例结直肠癌组织标本及其正常组织行冰冻切片，切片厚度约6 μm。采用链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒检测MCP1蛋白的表达情况。具体方法按常规操作，一抗MCP1的浓度150，室温下孵育60 min。MCP1检测后剩余标本用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片，进行免疫组织化学检测浸润的免疫细胞。显色系统采用DAB溶液。 　　1.2.3 结果判定 光学显微镜下，根据MCP1染色反应的强度，按其阳性细胞的数量评分及染色深度分别记为0～3分，其中阳性细胞数＜50%为1分，50%～80%为2分，＞80%为3分，染色深度以多数细胞的呈色反应为准，并根据每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分各自相乘的得分为其最低积分，积分分为四种，即阴性（一）为0～1分；弱阳性（+）为2分，阳性（）为3～4分，强阳性（）为5～6分。 　　1.2.4 免疫细胞计数方法 在400倍高倍镜视野下，随机选择5个视野，其中位于肿瘤内2个，位于肿瘤边缘3个，且带有肿瘤基底部基质。将着色呈红色（NK细胞AEC染色）或棕色（DAB染色）、形状类似免疫细胞的细胞被计数在内。每个视野肿瘤细胞及阳性细胞均被计数， 计算 出每100个肿瘤细胞含阳性细胞的百分数。＜20%记为“+”，“20%～50%”记为“”，＞50%记为“”，以上结果计数由2个病理医师共同完成。 　　1.3 统计学处理 采用SPSS统计软件包处理数字统计，MCP1表达与浸润细胞之间的关系采用χ2检验。 　　2 结果 　　2.1 结直肠癌组织MCP1蛋白的表达 MCP1表达的阳性率为36/40（90%），着色部位位于肿瘤细胞质中，着色深浅不一。正常结直肠黏膜组织也出现MCP1的弱阳性表达，且多集中于绒毛的表层。MCP1蛋白的表达与结直肠癌的转移呈负相关(χ2=8.732，P=0.033)，表达强者，转移发生率低（表1）。Spearmans检验(Spearmans=-0.461，P=0.003),表明MCP1的表达还与结直癌Dukes分期有关，表达强者，分期较早（表2）。但与结直肠癌肿瘤位置、分化及年龄无关（P0.05）。 　　表1 结直肠癌MCP1的表达与肿瘤转移的关系（略） 　　Ta