hxj血清清、球蛋白分离.pptVIP

何肖娟 hxj50701@163.com 生物化学与分子生物学实验教学中心 内 容 实验目的 掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法 掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法 掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法 掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法 了解柱层析技术 实验原理 蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。 不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别，可分离纯化各种蛋白质。 1. 粗提（盐析法） 由于血清中各种蛋白质分子的颗粒大小、所带电荷的多少和亲水程度不同，故盐析所需的盐浓度也不一样。 调节盐的浓度可使不同的蛋白质沉淀从而达到分离的目的。 2. 脱盐（凝胶层析） 盐析分离的蛋白质溶液中含有大量无机盐，必须先脱盐后才能进一步纯化。 脱盐有多种方法，本实验采用凝胶层析法。 凝胶层析法主要是根据混合物中各种物质分子大小的不同而将其分离的技术。 3.纯化（离子交换层析） 离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离 4.纯度鉴定（电泳） 三、实验材料 人血清 葡聚糖凝胶（G-25)层析柱 DEAE纤维离子交换层析柱 饱和硫酸铵溶液 20%磺基水杨酸 1%BaCl2溶液 电泳仪、电泳槽 四、实验过程 盐析（粗分离） 葡聚糖凝胶层析（脱盐） DEAE纤维素离子