ELISPOT技术原理及其应用.ppt

酶联免疫斑点Enzyme Linked ImmunoSPOT 第一部分：前言 1.ELISPOT技术起源与发展 2.细胞与细胞因子 3.ELISPOT技术原理 用抗体捕获培养中的细胞分泌的细胞因子，并以斑点显色的方式将其表现出来。 　ELISPOT 法源自 ELISA ，又突破传统 ELISA 法，是定量 ELISA 技术的延伸和新的发展。两者都可检测细胞产生的细胞因子或其他可溶性蛋白，它们最大的不同: ELISA测定的是蛋白浓度，ELISPOT测定的是细胞频率；（整体水平与单细胞水平） ELISA是免疫检测Immuno-Assay，而ELISPOT是生物检测Bio-Assay（活细胞，功能检测） ELISA检测的特异性表现在抗体上，ELISPOT检测的特异性及表现在双重的刺激源和抗体上。 5.ELISPOT的优点 目前，检测细胞因子或者细胞免疫反应的方法有以下几种：ELISA、ELISPOT、FACS、Tetramer、3H胸苷参入法、51Cr释放法。 高灵敏：度少至100－1,000个分子/Cell即能够被检测。比ELISA的灵敏度高200倍。 单细胞水平：即使只有一个阳性细胞也能够检测出来，比FACS灵敏。 高通量：每个研究人员每天可作数百样本的检测。High Throughput Screening 第二部分：技术特点 技术操作流程 ELISPOT技术要点