Westernblot法检测大鼠肝组织清蛋白的表达实验.pptVIP

核酸分子杂交 (molecular hybridization) 利用核酸分子的碱基互补原则而发展起来。 在碱性环境中加热或加入变性剂等条件下，双链DNA之间的氢键被破坏(变性)，双链解开成两条单链。 探针 (Probe) 带有标记的、并已知碱基序列的DNA或RNA片段，能与待测样本中单链核酸分子互补配对结合，进而检测是否有同源序列。 Southern 印迹杂交  （Southern Blotting) Edwin Southern 于1975年首创 Alwine于1977年建立。 用于组织细胞中总RNA或mRNA的定性和定量分析。 Western Blotting 蛋白免疫印迹 是20世纪70年代末80年代初，在蛋白质凝胶电泳和固相免疫测定的基础上发展而来。 Western-blot 基本原理 在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来进行检测。 Western-blot 的一般流程 蛋白样品的制备 SDS-聚丙烯酰胺凝 胶电泳 转膜 免疫检测 本实验操作步骤 本实验操作步骤 考马斯亮蓝法（Bradford法） 电荷效应 各种蛋白质所带电荷不同，有效迁移率亦不同，负载电荷多的移动快，反之则慢。 分子筛效应 凝胶电泳中因凝胶浓度不同，其网的孔径大小不同，可通过的蛋白质分子量范围就不同。