Westernblot、蛋白质双向电泳的原理、方法及在医学中的应用最终版.pptVIP

在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体，然后用这种多肽的特异抗体来检测。 优点： 1.快速（一种抗体） 2.没有二抗交叉反应引起的非特异性条带 缺点： 1.免疫反应性降低 2.无信号二级放大 3.抗体标记费时昂贵,使用不方便 优点： 1. 免疫特异性不受标记影响 2. 信号放大灵敏度高（多个二抗结合位点） 3. 多种标记的二抗可供选择 4. 可选择不同的Marker 缺点： 1. 交叉反应引起的非特异性条带 2. 额外的二抗孵育以及条件优化 直接法与用二抗的间接法相比有诸多不足，标记可用于很多种不同特异性的一抗，避免了标记很多一抗的需要，同时因为一抗结合不知一个二抗分子，所以二抗可以增强信号，所以一般情况下都采用间接法进行检测 预混分子量标准 高分子量标准 低分子量标准 宽分子量标准 预染分子量标准 单色预染 多色预染 修饰分子量标准 糖基化 磷酸化 荧光标记 高分子量标准 低分子量标准 宽分子量标准 单色预染 多色预染 糖基化 磷酸化 荧光标记 选择标准 1.膜与目的蛋白分子的结合能力（也就是单位面积的膜能结合蛋白的载量），以及膜的孔径（也就是拦截蛋白的大小） 2.不影响后续的显色检测（也就是适和用于所选的显色方法，信噪比好） 3.后继实验有其他要求，比如要做