原位杂交Northern_Blotting.pptVIP

* * cDNA 探针是目前应用最为广泛的一种探针。 DNA探针（包括cDNA探针）的优点： 　　①这类探针多克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽，制备方法简便。 　　②不易降解（相对RNA而言），一般能有效抑制DNA酶活性。 　　③DNA探针的标记方法较成熟，有多种方法可供选择，如缺口平移，随机引物法等，能用于同位素和非同位素标记。 * 若不知核酸序列，可根据蛋白质的氨基酸顺序推倒出核酸顺序，但要考虑到密码子的兼并性。多用于克隆筛选和点突变分析。 筛选寡核苷酸针的原则 ： 　　①长18～50bp，较长探针杂交时间较长合成量低；较短探针特异性会差些。 　　②碱基成分：G+C含量为40%～60%，超出此范围则会增加非特异杂交。 　　③探针分子内不应存在互补区，否则会出现抑制探针杂交的“发夹”状结构。 　　④避免单一碱基的重复出现（不能多于4个），如-CCCCC-。 　　⑤一旦选定某一序更符合上述标准，最好将序列与核酸库中核酸序列比较，探针序列应与含靶序列的核酸杂交，而与非靶区域的同源性不能超过70%或有连续8个或更多的碱基的同源，否则，该探针不能用。  * 半抗原 hapten 能与对应抗体结合出现抗原-抗体反应、又不能单独激发人或动物体产生抗体的抗原。它只有反应原性，不具免疫原性，又称不完全抗原。大多数多糖和所有的类脂都属于半抗原。 * 硅化载玻片是