第三章细胞生物学研究方法(王喜忠邹方东细胞生物学全套).ppt

五、放射自显影技术 ?原理及应用： ?利用同位素的放射自显影，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究； ?实现对细胞内生物大分子进行动态和追踪研究。 ?步骤： ?前体物掺入细胞（标记：持续标记和脉冲标记） ———放射自显影 六．定量细胞化学分析技术 ? 细胞显微分光光度术（microspectrophotometry） ?利用细胞内某些物质对特异光谱的吸收，测定这些物质 （如核酸与蛋白质等）在细胞内的含量。 包括： 紫外光显微分光光度测定法 可见光显微分光光度测定法 ? 流式细胞仪（Flow Cytometry） ?主要应用： 用于定量测定细胞中的DNA、RNA或某一特异蛋白的含量； 测定细胞群体中不同时相细胞的数量； 从细胞群体中分离某些特异染色的细胞； 分离DNA含量不同的中期染色体。 一、细胞的培养 ?动物细胞培养 ? 类型: 原代培养细胞（primary culture cell） 继代培养细胞（sub-culture cell） ? 细胞株（cell strain） ? 细胞系（cell line） ?植物细胞 原生质体培养 （体细胞培养） ?类型： 单倍体细胞培养（花药培养） ? 非细胞体系（cell-free system） 二、细胞工程 ?细胞融合（cell fusion）与细胞杂交（cell hybridization）技术 ?单克隆抗体（monoclone antibody）技术 图 ?细胞拆合与显微操作技术 ?物理法结合显微操作技术(图1、图2) ?化学结合法离心技术 制备核体（karyoplast）和胞质体（cytoplast） 对细胞生命活动的研究成为当今生命科学发展的瓶颈 对细胞生命活动的研究成为当今生命科学发展的瓶颈 取材— 前固定(4%戊二醛)PBS洗残余的戊后固定(4°C, 锇酸) 脱水(乙醇或丙酮) 包埋(环氧树脂) 修片 切片(600埃，银色) 染色(醋酸铀与铅盐) 观察 Fruit fly: generation time 2weeks;produce many offspring; embryo develop outside C elegans: a millimeter long, transparent body only a few cell types, from zygote to mature adult only in 3.5days. Zebrafish:2-4cm,embryos develop outside,generation time2-4months, 24hr form most of the tissues and organs, 2days hatches out of the egg. But it’s unclear about its genetic map. * 第三章 细胞生物学研究方法 进行初步观察 形成可验证的假说 设计对照试验 收集资料 解释结果 作出合理结论 查阅已 有知识 生物学研究模式生物 不同物种享有共同分子机制 第三章 细胞生物学研究方法 ?细胞形态结构观察方法 ?细胞组分的分析方法 ?细胞培养、细胞工程与显微操作技术 第一节 细胞形态结构的观察方法 ?光学显微镜技术（light microscopy） ?电子显微镜技术 (Electro microscopy) ?扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope ) 第二节 细胞组分的分析方法 ?离心分离技术 ?细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法 ?特异蛋白抗原的定位与定性 ?细胞内特异核酸的定位与定性 ?放射自显影技术 ?定量细胞化学分析技术 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 ?细胞的培养 ?细胞工程 一、光学显微镜技术（light microscopy ?普通复式光学显微镜技术 ?荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?激光共焦扫描显微镜技术（Laser Confocal Microscopy） ?相差显微镜（phase-contrast mic