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两种辣木DNA提取方法比较.pdf

第42卷 福建热作科技 Vbl.42NO.1 第1期 of 2017 FujianScience&TechnologyTropicalCrops 两种辣木DNA提取方法比较 林艺华,杨俊杰,张天翔,曹明华,林宗铿木 (福建省热带作物科学研究所,漳,’1,1363001) 摘要:以辣木嫩叶为材料,分别通过改良CTAB和试剂盒法提取7个品系辣木的总DNA,结果表明,试剂盒 法提取的辣木DNA在琼脂糖凝胶电泳中条带清晰,DNA纯度高,完整性好,且操作简单,快速,满足分子标 记中模板的需要,解决』,辣木提取中蛋白杂质多的问题。因此,在辣木分子标记实验中,选择试剂盒法提取辣 木总DNA是较为适宜的。 关键词:辣木;改良CTAB;试剂盒:DNA 中图分类号:Q946 文献标识码:A 辣木(Moringa 独特的经济价值和营养保健作用。辣木各个部位均可食用或入药,因其含有较高的蛋白质、维生素和矿 物质而在多个发展中国家广泛种植[14]。辣木在全世界约有13个种,随着人们对辣木功效和营养价值的 认可,近年来,在我国云南、海南、四川、广东、贵州和福建等多地快速推广种植,但一些地方盲目种 植、品种名称混乱的现象时有发生。因此,应用分子标记手段对辣木品系进行种质资源鉴定迫在眉睫, 而高质量的DNA是辣木植物分子生物学研究的基础。本研究采用改良CTAB法和植物基因组提取试剂 盒分别提取7种辣木品系的总DNA,通过比较其优劣以得到满足辣木分子标记中PCR扩增对于模板 DNA的要求,为辣木亲缘关系及遗传多样性分析奠定基础。 l材料与方法 1.1材料与试剂 本研究所用辣木样品共7份,均取白于本研究室实验田。品系编号及名称 表1所用辣木品系名称 见表1,试验地点为漳州市天宝镇五峰省热作所。植物基因组DNA提取试剂盒编号 品系名称 l 原种M0 购自北京天根生化科技有限公司。液氮,CTAB(十六烷基三乙基溴化铵),Tris 2 云南自选种Yl (三羟基氨基甲烷),EDTA(乙二胺四乙酸),B一巯基乙醇,氯仿,异戊醇, 异丙醇,无水乙醇,醋酸钠,氯化钠,盐酸,氢氧化钠,冰乙酸,硼酸,均为 3 非洲种 View 4 台湾 Nucleic 国药集团化学试剂有限公司分析纯产品,琼脂糖(Takara),Gold 5 PKMl Acid DNA stair(sbs),6×loadingBuffer(Takara),DL2,000Marker(Takara)均购自大 6 缅甸 连宝生物工程有限公司。 7 泰国 1.2试齐0配制 1M 1 mL双蒸水中,冷却至室温 Tris母液(pH值8.0):取Tris碱(分子量121.14)12.1g溶于80 后用浓HCl调节pH值至8.0,然后用超纯水定容,灭菌后使用。 0.5M

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