2.3 基因工程的常规技术课件.pptVIP

第三节 基因工程的常规技术 凝胶电泳技术 一 凝胶电泳技术 影响琼脂糖凝胶电泳的因素： DNA片段的大小 凝胶的类型 凝胶的浓度 电泳缓冲液 电压 二 杂交技术 1975，Edwen Southern提出分子印迹概念。 概念：将存在于凝胶中的生物大分子转移（印迹）于固定化介质上并加以检测分析的技术。目前主要应用于DNA，RNA，蛋白质的检测。 核酸分子杂交的基本原理： 具有互补序列两条单链核酸分子在一定条件下按碱基互补配对原则退火形成双链的过程。 杂交的双方是待测核酸和已知核酸序列，已知核酸序列称探针。 DNA印迹技术 Southern blotting 基因组DNA经限制性内切酶消化后，进行琼脂糖凝胶电泳，将含有DNA片断的凝胶放入变性溶液变性后，将硝酸纤维膜(NC)膜放在胶上，上面放吸水纸巾，利用毛吸作用使胶DNA转移质NC膜上，然后利用杂交技术检测NC膜上的DNA片断。 RNA印迹技术 Northern blotting 与Southern blotting相似，但不需要限制性内切酶切割。用于基因表达的特异性分析和定量分析。 蛋白质免疫印迹法 Western blotting: 免疫印迹法是检测蛋白质混合溶液中某种特定目的蛋白质的定性方法，也可以作为确定同一蛋白质在不同细胞或者同一种细