蛋白质层析技术幻灯片.pptVIP

蛋白质层析技术 导言 生物技术有三大部分：生化分离技术；DNA重组及基因转移技术；免疫检测技术。其中生化分离技术是生物技术的基础和支柱。 层析是最有效的分离手段，也是最重要的蛋白质纯化工具。层析主要是物理方法，是混合熵减少的过程，必然消耗自由能。 基因工程下游的核心是层析。 层析技术的理论和实践已高度发展和完善。 蛋白质结构组计划 目标：用十年的时间获得一万种蛋白的三维结构。 但是只有57%被克隆的蛋白能够成功表达。 而且在这些表达的蛋白中，只有 28% 的重组蛋白能够被纯化出来。 最终，只有2%-10%的最初的目标蛋白被成功的建立。 蛋白质层析分离纯化机制 电荷不同：离子交换层析 大小、形状：凝胶过滤层析 疏水区域：疏水层析 特异性：亲和层析 （选择性是最优秀的） 层析介质 生物兼容性：亲水性，大孔径，不会使生 物大分子失活，没有生物化学毒性—过强吸附、泄露。 化学稳定性：在生物大分子存在的化学条件下是稳定的。 必要的机械性能：流体中的耐压性、弹性。 聚合物机体孔的结构 结构：典型层析介质的放大观察 孔的结构可分为三种类型 整体柱（monolithic column ） 概念：它是由单体、引发剂、致孔剂等混合物通过原位制备而成一个棒状整体,具有制备方法简单、内部结构均匀、重现性好、具有较高的柱效和可进行快速分离等优点,已在反相色谱、离子交换色谱、