聚合酶链式反应及点突变的检测方法.pptVIP

聚合酶链式反应及点突变的检测方法 聚合酶链式反应于1983年由美国Cetus公司的K.Mullis建立，并和定点突变的发明者M.Smith一起荣获1993年度诺贝尔化学奖，为生命科学领域的研究开创了崭新时代。 PCR反应的特点 特异性强 引物与模板结合的特异性及聚合酶的忠实性 灵敏度高 指数增长，从pg (10-12)可扩增至 mg (10-6)水平 简便、快速 2～4 小时完成扩增 对标本的纯度要求低 DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板 一、PCR反应原理和反应过程 DNA的体外复制包括3个步骤： 变性（denaturation）:94 C ~95 C 退火（annealing）:40 C ~70 C 延伸（extension）:72 C 3个步骤作为PCR的一个循环，每当完成一个循环，一个分子的模板被复制为二个，产物量以指数形式增长。 PCR原理 d.NTPs 耐热DNA聚合酶 引物 添加反应混合液 及样本 变性 退火 加入试管中 延伸 继续延伸 循环 PCR原理 第二个循环 4个拷贝 第三个循环 8个拷贝 第n个循环 2n个拷贝 PCR原理 The Polymerase Chain Reaction (PCR) 18 20-30X 94 C (30 s) 40-60 C (30 s) 72