2014实验六食品添加剂的检测.ppt

HPLC Business Dept Shimadzu Corporation 实验六 食品中添加剂的检测 液相色谱基础知识—色谱起源 石油醚 碳酸钙颗粒 色素 玻璃柱 液相色谱仪流程图 输液泵 控制方式： 恒流控制 恒压控制 连接方式: 并联式往复泵 串联式往复泵 流动相 纯度：采用“ HPLC ”级溶剂 不用致柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配 高纯水/双蒸水 流动相处理 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 除去微小颗粒，避免堵塞色谱柱 尤其无机盐缓冲液 有机系过滤膜 水系过滤膜 流动相处理 脱气 除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响 柱流量不准 检测器基线波动 脱气注意点 每天脱气(无在线真空脱气器） 混合溶剂脱气时间不能过长 超声、通N2、抽真空等 进样器 自动进样器 进样体积随意确定 气动进样 电动进样 手动进样器：六通阀 样品环（定量） 全量注入 部分注入 柱温箱 控制温度 室温-70℃（±0.1℃） 柱温控制的优点 分析结果重现性好 提高柱效 降低柱压 保证检测稳定性 色谱柱 ODS柱(反相) 柱压：250-300kgf/cm2 柱温：40℃-58℃ 缓冲液pH：2～8 硅胶柱（正相） pH:3～4最稳定 流动相含水量越低，硅胶越稳定 色谱柱 离子交换柱 阳离子树脂 阴离子树脂 凝胶柱 分子量：几万-几百万 孔径：100A-300A 亲和柱 手性柱 检测器 常用检测器 紫外检测器/二极管阵列检测器 示差折光检测器 荧光检测器 电化学检测器 蒸发光散射检测器 检测器 紫外检测器(UV) 原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收 定量基础：比耳定律，A＝KCL 优点： 对温度和流速不敏感 可用于梯度洗提 缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质 检测器 紫外检测器(UV) 固定波长：低压汞灯提供固定254nm或280nm紫外光。 可变多波长：氘灯做光源，光栅分光 光二极管阵列：钨灯和氘灯组合光源，进入检测池的不是单色光，而是一段紫外波长上的光。 检测器 二极管阵列检测器（SPD） 21世纪标准紫外检测器 色谱定性依据： 保留时间←常规UV 峰纯度←SPD 优点 采集三维谱图 峰纯度检验 光谱库检索 可以发现单波长检测时未测到的峰 数据处理 色谱工作站 硬件控制 数据处理 色谱数据处理机 绘图仪 第二节 色谱流出曲线及有关术语 色谱流出曲线 色谱流出曲线和色谱峰 基线（a） 峰高（h） 定性：保留时间（从进样到出峰时间） 定量：峰面积（A），峰高（h) 信号 进样 空气峰 色谱峰 h a HPLC法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠 一、原理 样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。 二、仪器和试剂 HPLC仪（带紫外检测器） 甲醇：经滤膜（0.5μm）过滤 乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水至1000ml，溶解，经滤膜（0.5μm）过滤。 标准使用液：苯甲酸、山梨酸、糖精钠均为0.1mg/ml 三、操作步骤 (1)样品处理 (2)色谱条件：ODS柱、流动相（甲醇-乙酸铵=10/90,1.0ml/min）、进样20μl、检测波长230nm (3) 保留时间定性，外标峰面积法定量 结果计算: X（mg/ml)=标准品浓度×样品峰面积÷标准品面积 谢谢！ HPLC Business Dept Shimadzu Corporation