DNA分子标记技术在药用植物研究方面的应用.pptVIP

应用 种质资源研究 品质鉴定 构建遗传连锁图 基因定位（QTL） 标记辅助选择 比较基因组研究 基因克隆（图位克隆） 生物起源、进化、医学及法医学 原理 根据两端序列的保守性，设计引物；进行PCR，电泳分离，染色显带以检测、分析微卫星序列多态性；并确定基因排布序列及表型，最终达到成功鉴定的目的以及对一些药用植物次生代谢产物合成、分布、运输等规律的研究。 简而言之，就是通过对样本DNA多态性的分析，从而来得到样本DNA序列以及在遗传性状上的调控和差异。 EcoRⅠ酶切示意图 5’ AG----GAATTC---GAATTC----GAATTC---CG 3’3’ TC----CTTAAG---CTTAAG----CTTAAG---GC 5’ AG----G AATTC---G AATTC----G AATTC---CG TC----CTTAA G---CTTAA G----CTTAA G---GC5’ AG----GAATTC---GAATCC----GAATTC---CG 3’3’ TC----CTTAAG---CTTAGG----CTTAAG---GC 5’ AG----G AATTC---GAATCC----G AATTC---CG TC----CTTAA G---CTTAGG----CTTAA G---CG 微卫星DNA PCR扩增结果（示例） 500bp 400bp 300bp 240bp 该结果显示在所检查的人群中，该位点多态性有4种。 1.植物DNA的提取（CATB法）  ①离心机 ②水浴锅 ③研钵 ④微量移液器 实验仪器  2.PCR 2.1 SSR引物设计 根据Genbank已公布的序列来设计相对SSR引物。 2.2 PCR  模板DNA dNTP 引物 Buffer 模板DNA dNTP 引物 Buffer TaqDNA聚合酶 Taq 酶 模板DNA dNTP 引物 Buffer Taq 酶 模板DNA dNTP 引物 Buffer 94oC 5min 94℃ 55 ℃ 72 ℃ 循环30次 72 ℃ 6 min  PCR反应体系  3.电泳 制胶  4.染色及结果分析 4.1 银染 4.2 通过软件来分析结果 SSR标记的主要特点有： （1）数量丰富，广泛分布于整个基因 （2）具有较多的等位性变异； （3）共显性标记，可鉴别出杂合子和纯合子； （4）实验重复性好，结果可靠； （5）由于创建新的标记时需知道重复序列两端的序列信息， 因此其开发有一定困难，费用也较高。 简单序列重复区间（Inter-simple Sequence Repeat, ISSR) 序列标记位点（Sequence-Tagged Sites,STS) 小卫星DNA（Minisatellite DNA) 单链构型多态性（Single-strand Comformation Polymorphism,SSCP) 变性梯度凝胶电泳（Denaturing Gradient Gel Electrophoresis,DGGE) 其他分子标记方法 四、研究现状与展望 1.研究现状 任冰如等用RAPD技术对南、北苍术不同居群问的亲缘关系作了鉴定，从 DNA水平上证实了南、北苍术亲缘关系很近，差异很小。为后者的观点提供了有力的证据。 徐朝晖等在用TLC法(薄层色谱法，Thin Layer Chroma tography)不能有效区分的情况下，成功地用该技术将牛蒡子及其5种常易混淆的毛头牛蒡、大翅蓟、水飞蓟、云木香和紫穗槐的果实区分。 黄璐琦等应用RAPD技术对来源于13个种3个变种的天花粉及其类似品进行鉴别研究，证明RAPD技术鉴别药材具有一定的可靠性和实用价值，为解决粉末及破碎药材的鉴别提供了新的方法。 曹晖等采用 AP—PCR(任意引物聚合酶链反应，Arbitarily Primed PCR)和RAPD方法扩增菊科植物地胆草、白花地胆草和假地胆草以及商品药材苦地胆的基因组，获得可靠的DNA指纹图谱。Cap等采用 RAPD方法扩增蒲公英(Taraxacum mongolicum)及6种土蒲公英混淆品的基因组DNA，获得清晰可靠的DNA指纹图谱，根据琼脂糖凝胶上显示的DNA带型差异可鉴别蒲公英和土蒲公英混淆品。 RAPD技术在药用植物领域的应用还包括：人参属(Panax)12种植物的ITS区及5．8sr