第十四章基因工程及其在医学中的应用.pptVIP

（一）目的基因的获得 1. 化学合成法 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列 。 2.基因组DNA文库(genomic DNA library) 3. cDNA文库(cDNA library) 4. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR) 多利诞生过程 （三）印迹技术的类别及应用 1、DNA印迹技术 (Southern blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。 2、RNA印迹技术 (Northern blotting) 用于RNA的定性定量分析。 3、蛋白质的印迹分析 (Western blotting) 用于蛋白质定性定量及相互作用研究。 分子杂交实验 ① ② ③ 二、聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR) PCR的基本反应步骤 变性 95?C 延伸 72?C 退火 Tm-5?C 95?C 55?C 72?C PCR的主要用途 （一）目的基因的克隆 （二）基因的体外突变 （三）DNA和RNA的微量分析 （四）DNA序列测定 （五）测定基因的表达水平 三、DNA的序列分析 放射自显影 凝胶电泳 碱性专一性裂解反应 A/G G C/T C 5’GTCGTAA 5’GTCGTA 5’GTCGT 5’GTCG 5’GTC 5’GT 5’G - - + 硫酸二甲酯——G 甲酸——A/G 肼——C/T 肼（NaCl）——C （一）化学裂解法(Maxam-Gillbert法) （二）DNA链末端合成终止法 四、转基因动物、克隆动物 和基因剔除技术 　　　　　　　　　　　 （一）转基因动物 定义 是利用基因工程和胚胎工程技术，改变动物遗传 性状的新方法，是将外源基因导入动物受精卵， 再将受精卵植入到代孕动物的输卵管或子宫中培 育的动物。 目 录 （二）克隆动物 核转移技术 将动物体细胞核全部导入另一个体的去胞核的受精卵内，使之发育成个体，即克隆(clone)。 （三） 基因剔除技术 也称基因靶向(gene targeting)灭活，有目的去除动物体内某种基因的技术。又称基因敲除（gene knockout）。 基因敲入（gene knockin） 定义：是指利用分子生物学和分子遗传学的技术方 法通过直接检测基因结构是否改变、基因表 达有否异常，对疾病作出诊断。 基因诊断的概念和特点 特点： 针对性强；灵敏度高；适用范围广；早期诊断 第三节 基因工程在医学中的应用 （一）基因诊断（gene diagnosis） 甲型血友病基因组的限制性酶切分析 × BclⅠ酶切位点 5′ 5′ 3′ 突变基因 99bp 142bp 43bp 正常基因 基因治疗的概念 早期将通过基因转移技术用正常基因原位置换有 缺陷的基因治疗单基因遗传病叫做基因治疗。 目前广义上来讲,将某种遗传物质转移到患者细 胞内,使其在体内发挥作用,以达到治疗疾病 目的方法，均称为基因治疗。 （二）基因治疗（gene therapy） 1.掌握基因工程和限制性内切酶的概念； 2.掌握限制性内切酶的识别序列的特点。 3.掌握转化、转染和转导的区别； 4.掌握重组DNA技术的大致操作过程； 5.掌握分子杂交、基因诊断和基因治疗的概念； 6. 掌握PCR的原理和步骤。 本节课的重点 左下角处有超级链接到配伍末端 第一步，从一只6岁的芬兰多塞特种母羊的乳腺中取出一个本身并没有繁殖功能的普通细胞，将这个细胞的基因分离出来。 第二步，对一头苏格兰黑脸种母羊注射促性腺激素，经过28－33小时后取出卵，尽快去核，将这只卵细胞的基因取出，换上第一只羊的乳腺细胞的基因，再将这个基因已经调包的卵细胞放电激活。这样，这只已经调了包的卵细胞就像所有正常受精的卵细胞一样进行着正常的细胞分裂。 第三步，当调包的卵细胞分裂到一定阶段，胚胎已经形成后，再将这个胚胎移植到第三只母绵羊的子宫里。第三只母绵羊经过正常的妊娠后，多利就降生了。科学家们用DNA分析法表明：多利的细胞与供体细胞相似。 从这一过程来看，多利有什么特别的呢？ 第一，克隆羊多利没有父亲，但却有着三个母亲。 第二，三个母亲中，后两个母亲只是形式上的母亲。实际上是第一个母亲向后两个母亲借东西：向第二个母亲借卵子，但把卵子中的基因主部过滤出去，换上自己的基因；向第三个母亲借子宫，就像通常所说的借腹生子。 第三，克隆羊多利实际上是第一个母亲的百分之百的复制品。因此多利实际上只有一个妈妈，而且是