生物：1.1《DNA重组技术的基本工具》好).pptVIP

专题1 基因工程 定向基因改造设想 限制性内切酶 特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，在特定的切点切割。 举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 * 1.1 DNA重组技术的基本工具 The camelecow 设想一 能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？ 能否让细菌“吐出”蚕丝？ 设想二 能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？ 设想三 经过多年的努力，科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程。 DNA重组技术的基本工具 “分子手术刀”-- “分子缝合针”-- “分子运输车”-- 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 载体 1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” （又称限制酶） （1）来源： 主要是原核生物； （2）命名和种类： （3）作用： （4）结果： 约4000种； 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列(专一性)，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开(大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成,少数有4、5、8个) 形成两种末端 黏性末端 平末端 特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，在特定的切点切割 EcoRI只能识别GAATTC的核苷酸序列 只从G和A之间切开 ; SmaI只识别CCCGGG的核苷酸序列,只 从C和G之间切开,画出切割后的结果. 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，产生的是黏性末端。 下页 (1)种类： (2)作用部位： E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 2、 DNA连接酶——“分子缝合针” （黏性末端） （黏性末端和平末端） （连接平末端效率低） DNA聚合酶与DNA连接酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 区别 相同 需要模板，在单链上将一个个脱氧核苷酸连接起来 不需要模板将两个DNA片段连接起来； 将DNA双链上的两个缺口同时连接起来 形成磷酸二酯键 3、载体——“分子运输车” （1）载体的作用 将 转移到受体细胞中去。 目的基因 （2）常用的载体:质粒 细菌细胞质的质粒 λ噬菌体的衍生物 动植物病毒 质粒DNA分子上有特殊的标记基因，如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因等标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（检测目的基因是否导入受体细胞） 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并且具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 质粒是基因工程最常用的载体。 作为运载体必须具备的条件 具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 能够在受体细胞中自我复制并稳定地保存。 具有某些标记基因，便于进行筛选。 必需是安全的，不会对受体细胞有害。 注意：真正用作运载体的质粒都 是人工改造过的。 基因工程的概念 是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组技术和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的生物类型和生物产品，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫DNA重组技术；也叫基因拼接技术。 原理 目的 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的生物类型和生物产品 基因重组 基因工程概念的分析 “分子手术刀”-- “分子缝合针”-- “分子运输车”-- 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 载体 1.1 DNA重组技术的基本工具 1、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 课堂巩固 2、DNA连接酶催化的反应是( ) A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键 B．黏性末端碱基之间形成氢键 C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接 D．A、B、C都不正确 3、作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是( ) A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因 B、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达 C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件 D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选 4、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是( ) ①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④是蛋白质 ⑤是环状RNA ⑥是环状DNA ⑦能“友好