吴健民--乙肝病毒基因检测和基因型.pptVIP

乙肝检验新进展 乙肝病毒基因检测和基因型 乙型肝炎全球分布 乙肝现状 乙肝病毒携带者占人口10%. 全世界共有3亿乙肝携带者、我国乙肝携带者总数高达1.3亿. 10%转化为各种慢性肝病，包括有慢性肝炎、肝硬化和肝癌 我国慢性肝病人数3000万，肝病死亡人数每年30万 乙型肝炎病毒标志物检测 乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）为嗜肝DNA病毒，在电镜下可见大球形颗粒、小球形颗粒和管型颗粒。 完整的HBV颗粒为大球形颗粒，又称 Dane颗粒，直径42nm，分为包膜与核心两部分，包膜HBsAg，核心部分含有环状双股DNA、DNA聚合酶、HBcAg和HBeAg等，是病毒复制的主体。 乙肝病毒存在的三种形式 机体感染HBV后产生相应的免疫反应，形成多种不同的抗原抗体系统 表面抗原抗体系统 (HBsAg，抗HBs) 核心抗原抗体系统 (HBcAg，抗HBc) e 抗原抗体系统 (HBeAg，抗HBe) 临床意义（1） HBsAg： 1 .乙型肝炎具有传染性的标志之一，阳性常见于急性、慢性乙型肝炎，慢活肝。 2. 肝硬化、肝癌患者中有相当百分比的病人阳性，此现象说明肝硬化、肝癌患者有传染乙肝的危险，还说明了乙肝，肝硬化，肝癌发展演变的内在联系。乙肝是肝癌的病因之一。 3. 血液病患者，反复输血检出率高。 抗-HBc IgM ： 是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示病人血液有强传染性。抗-HBc IgM阳性也可见于慢性活动性肝炎。 抗-HBc IgG ： 高滴度表明机体正感染HBV；而低滴度抗-HBc IgG则是既往感染过HBV的指标，具有流行病学的意义。 (非保护性抗体) 乙型肝炎病毒血清标志物的综合评价 (1) (2) (3) (4) (5) ＋ － ＋ － ＋ 急性或慢性乙型肝炎，高传染性 ＋ － － － ＋ 急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg携带者 ＋ － － ＋ ＋ 急性乙肝趋向恢复或慢性乙肝，弱传染性 － ＋ － － ＋ 急性HBV感染康复期或有既往感染史，有 免疫力 － － － ＋ ＋ 乙肝恢复期，弱传染性 － － － － ＋ 急性HBV感染“窗口期”， 或既往曾感染 过乙肝 － ＋ － － － 接种HBV疫苗或HBV感染后康复 － ＋ － ＋ ＋ 急性乙肝康复期，开始产生免疫力 － － － － － 无HBV感染 乙肝病毒前S1蛋白 FQ-PCR（ Taqman技术） 荧光化学基础 反应体系中，不仅有两条普通的引物，还有一条荧光标记探针。这条探针的5’端和3’端分别标记了荧光报告基团（R）和荧光淬灭基团（Q）。当这条探针保持完整时，R基团的荧光信号被Q基团所淬灭；一旦探针被切断，淬灭作用消失，R基团的荧光信号就可以被测定。 HBV感染后常引起感染的慢性化，引起慢性肝炎，肝硬化。许多肝细胞癌患者也常常伴有HBV感染。不同的HBV亚型及亚型内特异部位的核苷酸位点的变异可能与感染的慢性化及感染后病情的转归有一定的关系。 1 排斥决定簇 HBsAg主蛋白还携带两对相互排斥的亚型决定簇d/y （122-134 aa指令d/y决定簇）和w/r （159-160 aa指令w/r决定簇）。2 四个主要亚型组成4个主要亚型：adw、adr、ayw和ayr。 ayw：地中海沿岸、非洲、中近东、俄罗斯、印度；adr：分布于我国，朝鲜、日本、远东地区；adw：由东非、北欧、美洲、及澳洲等地。ayr： 亚型极少见。  HBV基因型的临床意义 乙型肝炎病毒B和C基因型荧光PCR检测 原理： 采用Taqman荧光PCR技术，在一个PCR扩增系统中，加入两条基因型特异性荧光探针，一条探针检测 HBV C基因型，FAM荧光素作为报告基团；另一条探针检测 B 基因型，VIC荧光素作为报告基团。监测荧光定量PCR仪上双通道实验数据，可以非常简便判断HBV 基因型。 TaqMan探针检测 特点： 1.准确性好:与核酸序列测