色谱分离-3幻灯片.pptVIP

IEC操作很少采用恒定洗脱法，而多采用： 流动相离子强度线性增大的线性梯度洗脱法(1inear gradient e1ution) 或离子强度阶跃增大的逐次洗脱法(step wise elution)。 但是，IEC的操作变量远多于GFC，影响分离效果的因素非常复杂。这种复杂性给目标产物的选择性高度纯化带来了机遇，同时也增加了过程设计和规模放大的难度。 小型层析柱的实验数据一般不能直接用于规模(包括柱体积和处理量)放大，必须实施必要的探索性实验。 二、疏水性相互作用层析原理 组成蛋白质的氨基酸中包括一些疏水性氨基酸基团，如苯丙氨酸，酪氨酸；这些基团大部分处于蛋白质内部，但有部分疏水基团暴露于蛋白质表面。 在高离子强度盐溶液中，蛋白质表面的水化层被破坏，更多的疏水部分暴露在外，这些暴露在外的疏水基团与介质上的弱疏水性配基发生疏水性作用，被固定相(疏水性吸附剂)所吸附。 被固定相吸附蛋白质在疏水性吸附剂上的分配系数随流动相盐析盐浓度的提高而增大。 HIC采用高盐下吸附，低盐下洗脱。 原理图示 三、疏水性吸附剂 常用配基 苯基、短链烷基、 烷氨基、聚乙二醇聚醚 修饰密度 疏水配基修饰密度一般在10~40 umol/ml 疏水性吸附作用与配基的疏水性和配基密度成正比，故配基的