叶绿体中色素的提取和分离.pptVIP

【实 验】 叶绿体中色素的提取和分离 主讲人： 段 娜 肖祖文 助 理：谷维佳 黄素芬 孙捷吉 马牧原 周枭楠 色素的提取和分离实验 一、实验目的 进行绿叶中色素的提取和分离 探究绿叶中含有色素种类数目和颜色 培养合作和严谨的科学精神 色素的提取和分离实验 二、实验原理 提取：叶绿体色素易溶于无水乙醇（酒精、汽油、苯、石油醚等）等有机溶剂中，可以用无水乙醇提取绿叶中的叶绿体色素。 分离：纸层析法 不同的叶绿体色素随层析液在滤纸上扩散速度不同。不同的色素会在扩散过程中分离开来，形成条带。 （色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散速度快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散速度慢，因而可用层析液将不同的色素分离。） 色素的提取和分离实验 三、实验材料 【实验材料】：新鲜菠菜绿叶 【实验药品】：层析液（汽油：石油醚：丙酮：苯=20:2：2:1），无水乙 醇，石英砂，碳酸钙 【实验用具】：研钵，药匙，纱布，小烧杯，干燥滤纸， 剪刀，试管，毛细吸管，棉塞 色素的提取和分离实验 提取叶绿体色素 取材：取新鲜菠菜叶5g，撕去叶脉，尽量剪碎，放入研钵。 研磨：向研钵中放入少量石英砂和碳酸钙（量约为药匙的1/3），加入6ml无水乙醇，充分、迅速地研磨至匀浆状态。 过滤：在小烧杯上放上4层纱布，将研磨液倒入小烧杯，过 滤制备得到滤液。 【注】 加石英砂是为了使研磨充分 加碳酸钙是为了防止叶绿体色素被破坏 加入CaCO3和石英砂的量均很少，无水乙醇的量不应太少 四、实验步骤 色素的提取和分离实验 制备滤纸条：将干燥的定性滤纸剪成长与宽略小于试管长与宽的滤纸条，将其一端剪去两个角，并在距这一端1cm处用铅笔划线。 画滤液细线：用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画出细线（细而齐）。待滤液干后，重复画线3-4次。 【注】 画滤液线时尽量画直、画细、画浓 每次画完，要等滤液干时再重复画，以防滤液扩散开使滤液线过宽，影响结果 分离叶绿体色素 四、实验步骤 色素的提取和分离实验 固定装置：将3mL层析液倒入试管中，将画好线的滤纸条插入层析液中，用棉塞塞紧试管口。 观察现象：10min后，将滤纸条取出，风干。观察色素带及其颜色，作好记录。 【注】 放滤液条时，要避免滤液细线浸没到层析液。不要让滤纸条贴在层析管壁上。 层析液中一些成分易挥发，要避免开放在空气中。 分离叶绿体色素 四、实验步骤 1、选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的菠菜叶片。 2、研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。（无水乙醇和层析液都易挥发、易燃且有一定毒性） 3、每次点样前要把烧杯中的滤液摇匀。 4、尽量避免手上的杂质沾到滤纸条上。 5、实验时保持通风，安全操作 6、实验注重团队合作，组员们共同完成实验。 五、注意事项 色素的提取和分离实验 六、实验结果 叶绿素的提取与分离 七、实验总结 叶绿体中的色素能够在滤纸上彼此分离的原因是（ ） A．色素提取液中色素已经分层 B．阳光的照射使不同色素彼此分开 C．乙醇有使色素溶解并彼此分离的特性 D．各种色素在滤纸上随层析液扩散的速度不同 加SiO2、加CaCO3的目的分别是 ： 研磨充分；保护叶绿素。 为什么滤液细线越细、越齐越好？ 防止色素带之间部分重叠。 为什么层析液不能没及滤纸条的滤液细线？ 防止色素溶解在层析液中，影响实验结果。 八、课堂反馈 D 聚焦高考 （2012上海理综17）图6表示叶绿体色素提取分离实验中纸层析的结果，据图判断用作实验材料的叶片颜色为（ ） A．红色 B．黄色 C．绿色 D．紫色 B 聚焦高考 （2011江苏生物4）某研究组获得了水稻的叶黄素缺失突变体。将其叶片进行了红光照射光吸收测定和色素层析条带分析（从上至下），与正常叶片相比，实验结果是（ ） ?A.光吸收差异显著，色素带缺第2条?? ?B.光吸收差异不显著，色素带缺第2条? C.光吸收差异显著，色素带缺第3条?? ?D.光吸收差异不显著，色素带缺第3条 B （1）二氧化硅（SiO2）? 使研磨更加充分 （2）8.0????以1.0作为pH梯度进行实验 （3） pH小于6.0 ??叶绿素会由于酸性pH值而被破坏 （4）纸层析法? 主要步骤： 制备滤纸条 画色素液细线 层析分离色素 观察色素带 你做对了吗？ “叶绿素的提取与分离”实验可在哪些方面进行改进？ 九、课后思考